Жидкостная хроматография с гидрофильным взаимодействием: метод разделения гидрофильных полярных аналитов с помощью гидрофильных шариков

Жидкостная хроматография гидрофильного взаимодействия, HILIC, представляет собой метод разделения гидрофильных полярных соединений на основе степени их полярности. Начните с установки колонны HILIC, наполненной гидрофильными шариками, несущими полярные функциональные группы.

Сначала кондиционируют колонну с помощью уравновешивающего буфера и подвижной фазы – смеси органического растворителя и воды. Молекулы буфера стабилизируют рН, в то время как органический растворитель насыщает колонку. Молекулы воды обездвиживают и создают водный слой над гидрофильными шариками.

Загрузите образец, содержащий смесь гликанов - гидрофильных полярных соединений - помеченную флуоресцентной меткой. Пропустите пробу с помощью подвижного фазового градиента через колонку с оптимальной скоростью потока.

По мере продвижения образца по гидрофобной подвижной фазе гликаны мигрируют в водный слой, оставляя за собой примеси. Впоследствии гликаны перемещаются к полярным функциональным группам на бусинах. Здесь более полярные гликаны связываются сильно, в то время как менее полярные связываются слабо.

По мере снижения гидрофобности подвижной фазы в первую очередь элюируются слабосвязанные гликаны с меньшей поляр