Разделение бактериальных внеклеточных везикул на основе эксклюзионной хроматографии: метод выделения гетерогенной популяции грамнегативных бактериальных наружных мембранных везикул в зависимости от их размера
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 4:51 мин. • July 8th, 2025
При подходящих условиях культивирования грамотрицательные бактерии выделяют несущие груз внешние мембранные везикулы, или OMV, в надосадочную жидкость. Эти везикулы представляют собой неоднородные, маленькие, сферические структуры, которые опосредуют клеточную коммуникацию.
Чтобы фракционировать субпопуляции OMV разного размера, возьмите пустую колонку для эксклюзионной хроматографии с соответствующим фильтром в ее основании для поддержки матрицы.
Наполните колонку гелевой фильтрующей матрицей, состоящей из химически инертных сферических шариков с определенным размером пор, обеспечивая оптимальный размер для исключения попадания OMV большого размера. Уравновесьте колонну с помощью соответствующего буфера, чтобы предотвратить высыхание шариков для оптимальной очистки.
Загрузите надосадочную жидкость бактериальной культуры, содержащую субпопуляции OMV, белковых агрегатов и нуклеиновых кислот разного размера, в верхнюю часть колонки. Позвольте образцам работать под действием силы тяжести.
По мере того, как образцы проходят через колонку, более крупные OMV, которые не могут проникнуть в поры, перемещаются через межчастичные пространства между гелевыми шариками, чтобы сначала получить э
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео