Обратимая фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография: надежный метод количественного определения флуоресцентно меченных и дериватизированных сиаловых кислот, выделенных из печени мышей

Сиаловые кислоты, такие как N-ацетилнейраминовая кислота и N-гликолилнейраминовая кислота, представляют собой отрицательно заряженные углеводные фрагменты, обнаруженные на дистальных концах олигосахаридных цепей на поверхности клеток млекопитающих.

Чтобы количественно определить относительные количества этих сиаловых кислот в ткани печени мышей с помощью обратившейся высокоэффективной жидкостной хроматографии или RP-ВЭЖХ, сначала обрабатывают выделенную смесь сиаловых кислот дериватизационным агентом. Дериватизационный агент взаимодействует с функциональными группами сиаловых кислот, образуя стабильные флуоресцентные производные сиаловой кислоты.

Соберите колонку RP-HPLC, подключенную к флуоресцентному детектору. Колонка содержит пористую неподвижную фазу на основе диоксида кремния, связанную с неполярными, гидрофобными, алкильными лигандами цепи для облегчения селективного взаимодействия с производными сиаловой кислоты во время хроматографического прогона.

Уравновесьте колонку с помощью водной полярной подвижной фазы, содержащей низкие концентрации ацетонитрила, менее полярного органического растворителя, для оптимального кондиционирования колонки.

Загрузите в колонну дериватизиро