Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:05 мин. • July 8th, 2025
Бактериальные интегральные мембранные белки, закрепленные на липидных бислойных мембранах, облегчают транспортировку молекул через мембраны и передачу сигналов. Для структурных исследований специфические интегральные мембранные рекомбинантные белки сверхэкспрессируются с помощью слитого зеленого флуоресцентного белка GFP.
Для оценки стабильности рекомбинантных мембранных белков после детергентной солюбилизации получают бактериальную мембранную фракцию, содержащую GFP-меченые интегральные мембранные белки. Добавьте неионогенное моющее средство. За пределами критической концентрации моющее средство образует мицеллы.
Мицеллы взаимодействуют с липидными мембранами и мембранными белками, солюбилизируя мембраны и образуя белково-детергентные комплексы. Кроме того, гидрофобные трансмембранные области мембранных белков могут оставаться незамаскированными, вызывая агрегацию белков. Кроме того, свободные GFP могут возникать из-за деградации мембранных белков.
Центрифугируйте смесь. Соберите моюще-растворимую фракцию, содержащую надосадочную жидкость.
Соберите колонку для эксклюзионной хроматографии, подключенную к флуоресцентному детектору. Матрица колонки состоит из шариков агарозы с размер
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео