Аффинная хроматография на основе DFE: метод очистки моноклональных антител 2F5 из сырого образца с использованием условий элюирования на основе высокой ионной силы

DFE или DsRed-2F5-Epitope представляет собой рекомбинантный гибридный белок, состоящий из DsRed, флуоресцентного белка, и эпитопа 2F5 - сегмента гликопротеинового антигена оболочки HIV-1. Этот эпитоп обладает высоким сродством к своему паратопу - области в области, определяющей комплементарность, на моноклональном антителе 2F5.

Чтобы выделить моноклональные антитела 2F5 из сырого образца, берут колонку, заполненную гранулами пористой смолы, содержащими на своей поверхности иммобилизованные аффинные лиганды DFE. Промойте колонку подходящим уравновешивающим буфером для поддержания pH и предотвращения неспецифических взаимодействий между компонентами образца и смолой на последующих этапах.

Загрузите в колонку образец, содержащий целевые моноклональные антитела 2F5. Постепенно антитела в образце начинают протекать через колонку или неподвижную фазу.

В течение потока антитела обратимо взаимодействуют с аффинными лигандами DFE, иммобилизованными на стационарной фазе. В этих взаимодействиях паратоп на антителе 2F5 специфически связывается с его комплементарным эпитопом на лиганде DFE.

Промойте колонку уравновешивающим буфером, чтобы удалить нежелательную пробу, привязанную не к колонке. П