Микроскопия TIRF для визуализации динамики связи актина и микротрубочек

Актиновые мономеры полимеризуются по принципу «голова к хвосту», образуя тонкие волокна, называемые микрофиламентами. Аналогичным образом, тубулиновые димеры полимеризуются в более длинные полые цилиндрические микротрубочки. Эти компоненты цитоскелета поддерживают форму клеток и способствуют клеточной подвижности.

Для визуализации динамики связи актина и микротрубочек с помощью микроскопии полного внутреннего отражения (TIRF) требуется специальная сборка для визуализации.

Узел визуализации состоит из двух покровных стекол: верхнего покровного стекла с силановым покрытием m-PEG и нижнего покровного стекла с силановым покрытием biotin-PEG. Два покровных стекла расположены в продольном направлении с помощью двусторонней клейкой ленты и герметизированы с обоих концов для создания проточного канала.

Внесите пипетку BSA в проточный канал для заполнения камеры. Добавьте раствор стрептавидина, и инкубируйте. Молекулы стрептавидина связываются с молекулами биотина, прикрепленными к ПЭГ-силану нижней крышки.

Подайте буфер TIRF в канал. Добавьте раствор смеси цитоскелета, содержащий немеченные и зеленые димеры тубулина, меченные флуорофорами, а также немеченые, меченные биотином и фиолетовые