Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:23 мин. • July 8th, 2025
Для визуализации специфических белков ответа на повреждение ДНК при двухцепочечном разрыве ДНК, DSB, участках с помощью иммунофлуоресцентной микроскопии, начинают со предметных стекол, содержащих монослои мононуклеарных клеток человека с DSB. Фиксируют клетки параформальдегидом.
Обработайте неионогенным моющим средством, проникающим мембранами для доступа к внутриклеточным мишеням. Добавьте белоксодержащий блокирующий раствор, блокирующий неспецифические сайты связывания клеток. Инкубируйте с первичными антителами, которые связываются с белками целевого ответа.
Обрабатывайте смесью вторичных антител, помеченных различными флуорофорами, чтобы специфически связываться с их соответствующими первичными антителами, прикрепленными к белкам. Окрашивание ДНК с помощью DAPI. Добавьте монтажную среду; Установите покровное стекло.
Во время флуоресцентной микроскопии падающий световой пучок достигает возбуждающего фильтра, пропуская свет с определенной длиной волны возбуждения. Достигая дихроичного зеркала — светоделителя — возбуждающий свет избирательно отражается в сторону линзы объектива, которая фокусирует свет на образце.
Падающий возбуждающий свет возбуждает электроны флуорофора до более
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео