Спектроскопия ядерного магнитного резонанса для выявления множественных фосфорилирований в белках

Многократное фосфорилирование в белке включает добавление фосфатных групп к белку в различных положениях, в частности, в остатках серина и треонина.

Чтобы идентифицировать множественные фосфорилирования в белке, начните с пробирки, содержащей фосфорилированные белки, меченные азотом-15, что помогает дифференцировать амидные водороды от других атомов водорода в белке.

Добавьте внутреннее эталонное соединение ЯМР для точного измерения относительных резонансных частот. Перенесите смесь в трубку ядерного магнитного резонанса (ЯМР). Вставьте трубку во вращающуюся апертуру и поместите ее в ЯМР-спектрометр.

Присутствие фосфатов проявляет электрон-акцепторные эффекты в фосфорилированных остатках серина и треонина. В результате, амидные водороды фосфорилированных остатков, по-видимому, деэкранированы с меньшей электронной плотностью по сравнению с другими амидными водородами.

Амидные водороды с различными электронными средами испытывают дифференциальные магнитные поля вокруг ядер, достигая низкоэнергетических состояний.

Подайте короткий радиочастотный импульс, чтобы возбудить ядра водорода до более высокого энергетического состояния на определенной резонансной частоте, основанной на их элек