Выделение макрофагов из ганглия дорсального корешка мыши с помощью механической диссоциации

Ганглий дорсального корешка, или DRG, представляет собой скопление тел нейронных клеток вдоль спинного мозга, которые передают сенсорную информацию от периферической к центральной нервной системе. Повреждение периферических нервов вызывает накопление макрофагов в ДРГ и развитие нейропатической боли.

Чтобы изолировать жизнеспособные макрофаги методом без ферментов, возьмите свежепрепарированную ткань DRG мыши в гомогенизаторе, заполненном ледяным буфером, чтобы ограничить клеточный стресс. С помощью пестика механически гомогенизируйте ткань, чтобы освободить клетки.

Профильтруйте через клеточный фильтр, чтобы удалить клеточные комки и получить одноклеточную суспензию в проточном канале. Тканевый гомогенат содержит нейроны и ненейрональные клетки, к которым относятся макрофаги и свободно плавающий миелин — изолирующая оболочка нейронов.

Добавьте отфильтрованный гомогенат в пробирку, содержащую среду с градиентом плотности, и центрифугуйте. Под действием центробежной силы жизнеспособные клетки с более высокой плотностью плавучести оседают на дне трубки, образуя гранулу, в то время как миелин остается во взвешенном состоянии. Выбросьте надосадочную жидкость.

Ресуспендировать клетки в б