Магнитная изоляция микроглии из мозга детенышей мышей

Микроглия — резидентные макрофаги мозга — экспрессируют CD11b, интегрин клеточной поверхности.

Чтобы выделить микроглию из мозга детенышей мыши, берут фрагменты головного мозга в диссоциационные пробирки, содержащие буфер с папаином, протеолитическим ферментом и дезоксирибонуклеазой.

Поместите трубки на механический диссоциатор. Во время прогона диссоциатор механически разрушает ткани.

Папаин переваривает внеклеточный матрикс ткани, высвобождая клетки, в том числе микроглию, в суспензию. Дезоксирибонуклеаза разрушает свободную ДНК в суспензии, предотвращая неэффективную изоляцию клеток.

центрифуга. Завершите механическую диссоциацию пипетированием. Пропустите суспензию через клеточный фильтр, чтобы удалить мусор и клеточные комки и получить однородную популяцию одиночных клеток.

Инкубировать с суперпарамагнитными микрогранулами, функционализированными антителами к CD11b. Микрогранулы специфически связываются с CD11b на клетках, включая микроглию.

Постинкубация, центрифуга. Удалите надосадочную жидкость, содержащую несвязанные шарики. Снова суспендируйте ячейки в буфере. Груз на колонну, размещенную на магнитном сепараторе. Колонна состоит из матрицы с ферромагнитными шариками.

При