Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:44 мин. • July 8th, 2025
Чтобы обнаружить активацию инфламмасом NOD-подобного рецептора P3, или NLRP3, берут многолуночный планшет, содержащий активированные макрофаги, экспрессирующие белки NLRP3.
Обрабатывайте клетки средами, содержащими ионофоры и глицин. Ионофоры индуцируют отток ионов калия, активируя и олигомеризуя белки NLRP3. Олигомеризированный NLRP3 рекрутирует адапторные белки, облегчая связывание про-каспазы-1, образуя инфламмасомный комплекс NLRP3.
На инфламмасоме близость запускает ауторасщепление про-каспазы-1, высвобождая активные каспазы, инициируя пироптоз и ядерную конденсацию. Кроме того, глицин стабилизирует клеточную структуру, предотвращая лизис клеток.
Обрабатывайте макрофаги флуоресцентными репортерными зондами, содержащими группу связывания каспазы-1 и флуорофор, связанные через аминокислотную последовательность. Активированная каспаза-1 распознает аминокислотную последовательность зонда и связывается с его каспазосвязывающей группой, что позволяет визуализировать его.
Зафиксируйте клетки и покройте их флуоресцентным красителем, чтобы окрасить ядра. Изображение под флуоресцентным микроскопом.
Подсчет макрофагов с синими конденсированными ядрами и зелеными флуоресцентными очагами а
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео