Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:36 мин. • July 8th, 2025
Получить культуру полностью дифференцированных макрофагов в многолуночном планшете. Эти макрофаги имеют поверхностные маркеры, такие как толл-подобные рецепторы или TLR-2 — рецептор распознавания образов, который идентифицирует различные микробные компоненты.
Добавьте соответствующее количество флуоресцентно меченой суспензии Mycobacterium tuberculosis или Mtb клеток в каждую лунку и инкубируйте.
TLR-2 распознает липоарабиноманнан, или ЛАМ, сложный гликолипидный компонент клеточной стенки Mtb, инициируя фагоцитоз. Макрофаг интернализует Mtb, изолируя бактерию в фагосоме — мембранном компартменте.
Фагосома созревает, сливаясь с лизосомами, образуя фаголизосому — кислый и богатый ферментами компартмент.
В фаголизосоме Mtb ингибирует протонный насос вакуолярного типа, ответственный за выработку кислого pH. Следовательно, pH в фаголизосоме становится почти нейтральным, деактивируя ферменты, которые разрушают поглощенные патогены.
Взаимодействие между LAM и TLR2 также влияет на сигнальные пути клетки-хозяина, что приводит к модуляции поверхностных маркеров, участвующих в презентации антигена.
Инактивация фаголизосомы и ингибирование иммунного ответа хозяина позволяют Mtb сохраняться и реплицироваться в макрофаге.
Чтобы инфицировать клетки, полученные из моноцитов, разбавьте бактерии в соотношении 5 умно-10 на шестую колониеобразующие единицы на миллилитр в бессывороточной среде и замените надосадочную жидкость в каждой лунке шестилуночного клеточного культиватора 1 миллилитром свежей бессывороточной среды и 1 миллилитром бактериальной суспензии на лунку, чтобы получить кратность инфекции 5.
После 4-часовой инкубации в инкубаторе клеточных культур промывайте каждую лунку три раза 1 миллилитром стерильного буфера для промывки за одну промывку, осторожно наклоняя планшет, чтобы удалить весь объем буфера с углов лунок после каждой промывки. Затем ресуспендируют инфицированные MTb моноцитарные клетки в 2 миллилитрах полной среды без антибиотиков.