Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:00 мин. • July 8th, 2025
Возьмем, к примеру, мышь под наркозом, сконструированную для экспрессии флуоресцентного белка в нейтрофилах. Сбрейте тыльную сторону и сделайте круговой разрез. Иссеките разрезанную кожу, чтобы обнажить фасцию — слой соединительной ткани под ней.
Возьмите шприц, содержащий суспензию золотистого стафилококка — патогенной бактерии — генетически модифицированную для получения биолюминесценции. Введите суспензию между фасцией и подлежащей тканью, вызвав локализованную раневую инфекцию.
Рецепторы распознавания образов на стромальных клетках в фасции распознают связанные с патогенами молекулярные паттерны на бактериях. Это связывание вызывает высвобождение провоспалительных цитокинов и хемоаттрактантов, что приводит к воспалению.
Хемоаттрактанты рекрутируют циркуляторные нейтрофилы в месте инфекции. Поступающие нейтрофилы поглощают бактерии в фагосому, которая сливается с цитоплазматическими гранулами, вызывая высвобождение антимикробных пептидов.
НАДФН-оксидаза — ферментный комплекс — собирается на мембране фагосомы и производит активные формы кислорода или АФК. Антимикробные пептиды и АФК вызывают бактериальную деградацию.
В качестве контрответа бактерии выделяют факторы вирулентности, которые проникают в мембрану нейтрофилов, вызывая лизис клеток. Бактерии также выделяют ферменты для отложения фибрина, чтобы избежать фагоцитоза.
Иммунный ответ приводит к абсцессу — фибриновой капсуле, содержащей бактериальные клетки, нейтрофилы и мертвые клетки.
Запишите флуоресценцию нейтрофилов и бактериальную биолюминесценцию для визуализации взаимодействия бактерий и нейтрофилов.
Для прививки от золотистого стафилококка наполните инсулиновый шприц 28-го калибра 50 микролитрами приготовленного биолюминесцентного бактериального инокулянта и пальцем оттяните дерму раненого животного в сторону. Держа шприц почти параллельно ткани, медленно вводите шприц в ткань до тех пор, пока не почувствуется резкое снижение сопротивления, свидетельствующее о проколе фасции.
С иглой, помещенной в центр раны, медленно введите весь объем инокулянта. Убедитесь, что инокулянт образует пузырь в центре раны с минимальной утечкой или рассеиванием, и медленно извлеките шприц из животного. Затем верните животное в клетку с теплом и наблюдением до полного выздоровления.