Анализ для изучения роли витронектина в адгезии бактерий к эпителиальным клеткам хозяина

Возьмите многолуночный планшет, содержащий адгезивные монослои эпителиальных клеток. Замените среды на среды, не содержащие сыворотки, чтобы предотвратить интерференцию сывороточных белков. После инкубации удалите среду. Промойте ячейки буфером. Добавьте охлажденную безсывороточную среду, содержащую витронектин. Инкубируйте при более низких температурах.

N-концевой RGD-домен витронектина связывается с рецепторами интегрина поверхности эпителиальных клеток. Более низкие температуры препятствуют клеточной интернализации комплекса витронектин-интегрин.

После насыщения интегринового рецептора удалите среду. Промойте буфером, чтобы удалить избыток витронектина, который может повлиять на связывание бактериального витронектин-зависимого интегрина.

Добавьте суспензию Haemophilus influenzae типа f, или Hif, грамрицательного бактериального патогена. Инкубировать.

Белок H на поверхности Hif связывается с С-концом витронектина, способствуя прикреплению Hif к эпителиальной клетке и последующей интернализации.

Удалите носитель и промойте буфером, чтобы удалить несвязанный Hif. Используйте фермент для отслоения клеток для сбора клеток. Добавьте сыворотку, содержащую среду, чтобы остановить фермен