Количественное определение биоактивных интерферонов I типа с использованием репортерного анализа секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы

Для количественного определения биоактивных интерферонов I типа, таких как интерферон-альфа и интерферон-бета, в тестовом образце берут многолуночный планшет, содержащий сконструированные репортерные клетки. Эти клетки экспрессируют секретируемую эмбриональную щелочную фосфатазу, SEAP, репортерный ген под контролем интерферон-альфа и бета-индуцируемого промотора.

Добавьте тестовый образец, содержащий неизвестную концентрацию интерферона I типа. Пипетка с диапазоном концентраций интерферона I типа человека в другие лунки, которые действуют как стандартные контрольные приборы. Инкубировать.

Интерферон I типа в исследуемой лунке связывается со специфическим рецептором клеточной поверхности, активируя янус-киназы. Эти протеинкиназы фосфорилируют преобразователи сигнала и активаторы транскрипции, STAT, белки, которые димеризуются и образуют комплекс со специфическим регуляторным фактором интерферона.

Попадая в ядро, комплекс связывается со специфической последовательностью ДНК в индуцируемом интерферон-альфа и бета-индуцируемом промоторе, активируя транскрипцию гена SEAP и продуцируя ферменты SEAP, которые секретируются в среду.

Перенос среды, содержащей SEAP, в многолуночные лунки с по