JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 3:52 мин • July 8th, 2025
Чтобы вызвать системное воспаление — широко распространенную воспалительную реакцию, начните с размещения мыши, находящейся под наркозом, обратной стороной вверх. Возьмите шприц, содержащий микобактериальную эмульсию микобактериальных антиген-адъювантных депо — локализованного масляного резервуара антиген-адъювантной смеси.
Прокалывайте слои кожи эпидермиса и дермы мыши и вводите антиген-адъювантную эмульсию подкожно проксимальнее пахового лимфатического узла. После инъекции депо непрерывно высвобождает антигены в окружающие ткани, обеспечивая длительное воздействие антигенов на иммунную систему.
Антигенпрезентирующие клетки, или АПК, в тканях взаимодействуют с введенными микобактериальными антигенами, интернализуются и перерабатывают их в пептиды. Затем эти пептиды представлены на поверхности АПК с использованием основных комплексов гистосовместимости, вызывая высвобождение провоспалительных цитокинов и хемокинов.
Этот процесс порождает локализованное воспаление и запускает открытие лимфатических сосудов, что позволяет иммунным клеткам, в том числе АПК, несущим антиген, попадать в лимфатическую систему и достигать пахового лимфатического узла.
В лимфатических узлах Т-клеточные рецепторы Т-хелперов взаимодействуют с антигенами на поверхности АПК и активируются. Активированные Т-клетки выделяют провоспалительные цитокины, которые путешествуют по лимфатическим сосудам и высвобождаются в различные другие ткани.
Высвобождаемые провоспалительные цитокины привлекают иммунные клетки к этим тканям, вызывая системное воспаление.
Для начала разжалуйте корпус блока ультразвукового преобразователя и очистите щуп 70% спиртовым тампоном. Затем включите ультразвуковую аппарат и установите мощность на 4, повернув ручку управления мощностью.
Затем, чтобы получить тонкую суспензию Mycobacterium tuberculosis H37Ra в PBS, погрузите кончик зонда в порошок микобактерий, содержащий PBS. Обрабатывайте смесь ультразвуком на льду в течение 30 секунд, затем сделайте паузу в течение 30 секунд и повторяйте в общей сложности 5 минут, чтобы полностью рассеять порошок в ровную суспензию без нагрева жидкости. Далее добавьте в смесь 2,5 миллилитра неполного адъюванта Фройнда, и повторяйте процесс ультразвука на льду до тех пор, пока эмульсия не образует консистенцию, похожую на зубную пасту.
Для подкожного введения загрузите от 200 до 300 микролитров микобактериальной эмульсии в 1-миллилитровый шприц. Выдавите воздух из шприца и продолжайте наполнять шприц, периодически переворачивая и постукивая, пока он не заполнится.
Затем поместите подкожные инъекции либо на тыльную поверхность бедер, либо на вентральную поверхность ног, проксимальную к области паховых лимфатических узлов мыши C57Black/6J в возрасте от 6 до 10 недель, находящейся под наркозом. Осторожно введите иглу, стараясь не проникнуть в мышцу, и введите 50 микролитров эмульсии в подкожное пространство. Не удаляйте иглу сразу, чтобы дать возможность полностью ввести густую эмульсию.
В данной статье демонстрируется способ индукции системного воспаления у мышей с использованием эмульсии адъюванта и микобактериального антигена, которая служит моделью постинфекционного увеита. В протоколе подробно описаны подготовка эмульсии антигена, подкожное введение в область лимфатических узлов и последующая иммунная активация, приводящая к генерализованному воспалению. Данная модель позволяет исследователям изучать иммунные механизмы, лежащие в основе постинфекционного увеита.
Индукция системного воспаления у мышиных моделей посредством подкожного введения депо микобактериального антигена с адъювантом позволяет осуществлять контролируемое изучение путей активации иммунитета, имеющих значение для постинфекционных воспалительных заболеваний. Данный подход обеспечивает воспроизводимую платформу для оценки привлечения иммунных клеток, высвобождения цитокинов и системных воспалительных реакций, что способствует валидации мишеней на ранних этапах и снижению механистических рисков при поиске новых лекарственных препаратов в области иммунологии. Трансляционная значимость данной модели для изучения постинфекционного увеита повышает ее ценность для сортировки портфеля разработок и оценки доклинических кандидатов.
Данная модель воспаления на мышах интегрирована в континуум от поиска до доклинических исследований, обеспечивая переход от ранней валидации иммунных путей к оценке трансляционных кандидатов.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026