Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:06 мин. • July 8th, 2025
Начните с размороженной культуры Mycobacterium bovis BCG lux, генетически модифицированного биолюминесцентного штамма аттенуированной Mycobacterium bovis, экспрессирующего репортерный фермент люциферазу.
Инокулируйте суспензию в культуральную колбу, содержащую питательную среду с добавлением антибиотика. Инкубировать. БЦЖ Люкс содержит ген устойчивости к гигромицину, способствующий его выживанию и росту.
После инкубации приготовьте подходящие разведения культур с помощью буфера в люминометром. Переложите на люминометр, загруженный длинноцепочечным раствором алифатической альдегидной подложки. Во время прогона альдегид вводится в суспензию микобактерий, которая проникает в клетки.
Бактериальная люцифераза катализирует окисление эндогенного восстановленного мононуклеотида флавина и альдегида, что приводит к излучению сине-зеленого света. Измеренная интенсивность биолюминесценции указывает на метаболическую активность БЦЖ люкс и коррелирует с показателем жизнеспособных бактерий или колониеобразующих единиц, КОЕ.
Далее центрифугируют оставшуюся культуру микобактерий. Ресуспендируйте микобактериальную гранулу в буфере, содержащем неионогенное поверхностно-активное вещество, чтобы предот
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео