Методика создания адъювант-индуцированной модели мыши с артритом

Чтобы создать модель мыши, вызванной адъювантом, начните с мыши, находящейся под наркозом, в положении лежа.

Возьмите шприц, содержащий полный адъювант Фрейнда или КФА, суспензию убитой при нагревании микобактерии туберкулеза в масле. Введите CFA в пространство голеностопного сустава — заполненную синовиальной жидкостью область между костью голени и костью стопы — с последующим введением в ткани, окружающие сустав, вызывая хроническое воспаление.

Заполненная жидкостью полость граничит с синовиальной мембраной, состоящей из выстилающего слоя, обогащенного макрофагами и фибробластами, функционирующими как иммунологический барьер, и подстилающей интерстициальной ткани.

Макрофаги распознают бактериальный антиген и трансформируются в фагоцитарный фенотип, нарушая целостность барьера. Макрофаги также выделяют хемоаттрактанты и цитокины. Высвобождаемые хемоаттрактанты опосредуют рекрутирование циркуляторных нейтрофилов к месту инфекции.

Распознавание бактериального антигена активирует нейтрофилы, что приводит к дегрануляции. Высвобожденные матриксные металлопротеиназы и протеазы вызывают повреждение хряща и длительное воспаление.

Секретируемые макрофагами цитокины также связываются с рецепторами на синовиальных фибробластах. Связывание цитокинов и распознавание антигена индуцируют активацию фибробластов.

Активированные фибробласты подвергаются аномальной пролиферации, что приводит к гиперплазии синовиальной оболочки, что приводит к избыточной выработке синовиальной жидкости и отеку суставов, характерному для артрита.

Приостановите полный адъювант Фройнда, сделав вихрь не менее чем на пять секунд. Затем наберите 100 микролитров суспензии в инжектор инсулина.

После обезболивания отметьте выбранную лапу и введите 20 микролитров полного адъюванта Фрейнда из инжектора в четыре околосуставные точки на пространстве голеностопного сустава. Поместите обработанных мышей в новую камеру. Следите за мышами, чтобы убедиться, что они дышат до тех пор, пока не восстановят способность двигаться. Каждые три дня используйте карманный толщиномер для измерения диаметра голеностопного сустава.

Кроме того, оценивайте тяжесть артрита по критерию оценки артрита. Ноль — это нормально. Нет признаков эритемы и отека.

Один из них – самый легкий артрит. Эритема и легкий отек локализуются в области предплюсны или голеностопного сустава. Во-вторых, это умеренный артрит. Эритема и легкая припухлость, распространяющиеся от лодыжки до предплюсны. В-третьих, это тяжелый артрит. Эритема и умеренный отек, распространяющиеся от голеностопного сустава до плюсневых суставов. Четвертая – это самый тяжелый артрит. Эритема и сильный отек охватывают лодыжку, стопу и пальцы рук, или анкилоз конечности.