Методика внутрижелудочного зондирования для контролируемой инфекции Helicobacter у мышей

Чтобы создать модель инфекции Helicobacter pylori, начните с мыши, находящейся под наркозом и свободной от патогенов. Крепко задержите мышь, чтобы свести к минимуму движения во время процедуры.

Возьмите шприц, наполненный бактериальной суспензией. Подсоединить полиэтиленовый катетер к игле шприца для внутрижелудочного зондирования — техника доставки суспензии непосредственно в желудок.

Вставьте катетер в центр открытого рта, чтобы получить доступ к пищеводу, мышечной трубке, соединяющей рот с желудком. Осторожно проведите катетер через пищевод, пока он не достигнет желудка, и доставьте бактериальную суспензию непосредственно в его кислую среду.

Инокулированные бактерии выделяют уреазу, фермент, который превращает мочевину в аммиак и углекислый газ. Аммиак повышает pH желудка, нейтрализуя кислотность и позволяя бактериям выжить.

Эти бактерии используют свои жгутики для прохождения через защитный слой слизи, что позволяет им достигать эпителия желудка, где они прикрепляются к клеткам с помощью белков-адгезинов. При прикреплении эти бактерии выделяют факторы вирулентности, которые разрушают плотные соединения между эпителиальными клетками.

Это структурное нарушение способствует бактериальной инвазии и колонизации в более глубоких тканях, в конечном итоге создавая контролируемую инфекцию в желудке.

Добавьте бактериальные суспензии в 15-миллилитровые полистирольные пробирки и с помощью пластиковой петли перенесите одну каплю объемом от 10 до 20 микролитров от каждой культуры на отдельные стекла микроскопа. Затем оцените жизнеспособность и подвижность бактерий с помощью фазово-контрастной микроскопии при 100-кратном увеличении.

Используйте инокуляцию H. pylori только в том случае, если большинство бактерий имеют бациллярную форму. Инокуляция H. felis должна содержать в первую очередь спиралевидные бактерии, и загружать инокулю в индивидуальные одноразовые шприцы объемом 1 миллилитров. Оснастите каждый шприц иглой 23 калибра и с помощью пластиковой парафиновой пленки прикрепите к каждой игле одноразовый полиэтиленовый катетер.

Затем вручную ограничьте 6-8-недельную мышь, свободную от патогенов и хеликобактеров, за загривок шеи и хвоста и вставьте один катетер в центр открытой челюсти. Направляйте катетер в каудальном направлении к пищеводу, вытягивая шейку мыши, чтобы обеспечить легкий доступ к желудку через пищевод и в сторону от трахеи до тех пор, пока большая часть или весь катетер не перестанут быть видимыми и не будет ощущаться сопротивление. Затем доставьте не менее 1 x 10⁵ бактерий, чтобы обеспечить оптимальную колонизацию при патологии заболевания.