Количественная оценка нагрузки Helicobacter pylori в инфицированном желудке мыши

Чтобы количественно оценить колонизацию Helicobacter pylori в инфицированном желудке мыши, начните с уплощенной ткани желудка, содержащей тело и антральные отделы, взвешенных в питательных средах для поддержания жизнеспособности бактерий.

Гомогенизируйте для расщепления желудочной ткани со слоем слизи, высвобождая Helicobacter pylori из ткани в среду. Выполняют серийные разведения полученного гомогената желудка с помощью среды.

Получают высушенный агар из лошадиной крови, HBA, пластины, разделенные на несколько сегментов. Планшеты с ГБА дополнены смесью антибиотиков. Переложите каждое разведение гомогената на отдельные сегменты пластины и равномерно распределите.

После сушки расположите пластины в перевернутом положении в увлажненной банке для анаэробных культур со специализированными газовыми смесями. Инкубировать.

Микроаэрофильная среда, обеспечиваемая баночкой для анаэробных культур в сочетании с питательными веществами HBA, способствует росту Helicobacter pylori и образованию колоний. Антибиотики в составе ГБК подавляют рост видов бактерий из эндогенной микробиоты желудка.

Подсчитайте колонии Helicobacter pylori на сегментах HBA-планшетов, попадающих в определенный исчисляемый диапазон.

Рассчитайте нагрузку Helicobacter pylori в ткани желудка, указав степень бактериальной колонизации в ткани.

Для подсчета количества жизнеспособных H. pylori в желудке после инфекции гомогенизируйте образцы желудка, хранящиеся в BHI, и выполните повторные серийные разведения полученных гомогенатов желудка в свежем стерильном бульоне.

Разделите предварительно высушенный агар лошадиной крови или пластины с HBA, дополненные дополнительными антибиотиками, на три или четыре сегмента и, используя адаптацию метода Майлза и Мисры, добавьте от 10 до 100 микролитров каждого разведения гомогената желудка на сегмент каждой пластины агара. Разложите гомогенаты стерильными пластиковыми петлями и дайте пластинам высохнуть. Затем поместите пластины в перевернутое положение в банки с анаэробным газом, содержащие чашку Петри с водой и газовый пакет, затем инкубируйте банки при температуре 37 градусов Цельсия в течение четырех-семи дней.

Когда можно наблюдать колонии, перечислите сегменты, содержащие от 10 до 100 изолированных колоний.