Трансуретральная катетеризация и бактериальная инокуляция для создания модели инфекции мочевыводящих путей у самцов мышей

Возьмите мышь, находящегося под наркозом, и вставьте катетер в его гениталии.

Ввести в мочеиспускательный канал уропатогенные бактерии. Внутри мочевыводящих путей бактерия прикрепляется к уроэпителиальной клетке.

Взаимодействие поверхностных белков бактерий с белками мембраны клетки-хозяина вызывает перестройку цитоскелета, в результате чего мембрана клетки-хозяина плотно обхватывает бактерию с помощью механизма молнии.

Впоследствии бактерия интернализуется в мембранно-связанном везикуле. Внутри везикулы бактерия продуцирует мономеры α-гемолизинового токсина, которые собираются, образуя поровый комплекс в везикулярной мембране.

Бактерия улетучивается через поровый комплекс в цитоплазму клетки-хозяина, где она реплицируется, образуя внутриклеточные бактериальные сообщества, или IBC. IBC представляют собой плотные, похожие на биопленку структуры внутри клеток хозяина, защищенные от прямой атаки иммунными клетками, присутствующими во внеклеточном пространстве.

По мере того, как уропатогенные бактерии созревают в IBC, они в конечном итоге покидают клетки-хозяева, чтобы заразить соседние клетки, вызывая инфекции мочевыводящих путей.

Чтобы сделать прививку самцам мышей, поместите два щипца большого пальца краниально и каудально к наружным половым органам мыши. Втяните препуций, чтобы полностью обнажить головку полового члена. Затем, как только пенис будет расположен снаружи, отпустите щипцы для большого пальца. Переместите щипцы так, чтобы стабилизировать выступающий пенис перпендикулярно животному, удерживая орган мягко, но туго. Затем через небольшое отверстие в кончике уретрального прохода осторожно введите катетер и аккуратно введите его в половой член с помощью щипцов для мягкого поддержания напряжения.

Как только ступица катетера встретится с кончиком полового члена, очень медленно выведите 50 микролитров инокулюма, сохраняя при этом положение полового члена. Обратите внимание на качество инстилляции в соответствии с заранее определенной оценкой качества инстилляции, такой как показанная здесь. Медленно втяните катетер в течение 5 секунд, чтобы предотвратить утечку инокулюма. Поместите мышь в клетку в положение лежа на спине. Животное должно начать восстанавливаться через 30-45 минут после введения анестетика.