Количественная оценка инфильтрации иммунных клеток в ткани мочевого пузыря мыши, инфицированной E. coli, с помощью проточной цитометрии

0 просмотров3:43 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Чтобы количественно оценить инфильтрацию иммунных клеток в ткани мочевого пузыря мыши, инфицированной E. coli, поместите измельченную ткань в буфер для пищеварения, содержащий коллагеназу и дезоксирибонуклеазу.

Инкубируйте с регулярным встряхиванием, чтобы нарушить ткань.

Коллагеназа переваривает внеклеточный матрикс ткани, высвобождая клетки. Дезоксирибонуклеаза разрушает интерферирующую свободную ДНК.

После инкубации добавьте буфер с хелатирующим агентом и фетальную бычью сыворотку для инактивации пищеварительных ферментов.

Процедите переваренную смесь через ситечко, чтобы удалить остатки тканей и соединительной ткани, получив одноклеточную суспензию.

Центрифугируйте и ресуспендируйте клетки в буфере, содержащем Fc-блокирующие антитела. Эти антитела связываются с Fc-рецепторами иммунных клеток, предотвращая связывание неспецифических антител.

Добавьте меченые флуорофорами анти-CD45 антитела, которые связываются с трансмембранным белком CD45 на иммунных клетках.

Центрифугируйте и пропустите ресуспендированные клетки через сетчатое фильтр для удаления клеточных агрегатов.

С помощью проточного цитометра измерьте сигналы флуоресценции от флуорофор-конъюгированных антител на иммунных клетках, чтобы количественно оценить инфильтрацию иммунных клеток в мочевой пузырь.

Чтобы провести проточную цитометрию на ткани мочевого пузыря, после изоляции мочевого пузыря, как показано на рисунке, используйте ножницы, чтобы хорошо измельчить ткань. Добавьте 1 измельченный пузырь в каждую трубку, содержащую буфер для пищеварения, затем встряхните трубку, чтобы промыть измельченную ткань в буфере для пищеварения, и держите ее на льду, пока все пузыри не будут препарированы и измельчены. Инкубируйте измельченные пузыри при температуре 37 градусов Цельсия в течение 60-75 минут, энергично встряхивая вручную в течение 5 секунд каждые 15 минут.

Когда ткань имеет стекловидный, прозрачный вид, напоминающий влажную папиросную бумагу, пищеварение завершено. Инактивируйте ферменты пищеварения, добавив от 2 до 3 миллилитров ледяного проточного цитометрического буфера, и аккуратно перемешайте. Затем поместите трубки на лед.

Чтобы обеспечить одноклеточную суспензию и удалить любую соединительную ткань, пропустите содержимое пробирки через 100-микрометровый фильтр, помещенный в 15-миллилитровую коническую трубку. Затем концом поршня шприца аккуратно продавите любую оставшуюся ткань через фильтр. Промойте фильтр еще 2 миллилитрами буфера для проточной цитометрии и держите образцы на льду. Затем промойте образцы центрифугированием при 200-кратном g при 4 градусах Цельсия в течение 7 минут.

Повторно суспендируйте гранулу в 100 микролитрах буфера для проточной цитометрии, содержащего Fc-блок, разбавленного до 5 микрограммов на миллилитр, и переложите в 96-луночный планшет с круглым дном. Через 10 – 15 минут добавьте по 100 микролитров желаемого коктейля антител в каждый образец. Затем инкубируйте образцы на льду, защищенном от света, в течение 30-45 минут. Промойте образцы центрифугированием при 200 умноженных на г при 4 градусах Цельсия в течение 7 минут.

Наконец, ресуспендируйте клеточные гранулы в 200 микролитрах буфера для проточной цитометрии и пропустите образцы через клеточное сетчатое фильтр толщиной 40 микрометров на 5-миллилитровой полистирольной трубке непосредственно перед получением на проточном цитометре.

10:19

Мышиной модели группы B Streptococcus Вагинальный Колонизация

Похожие видео

0 Просмотры

04:01

Трансуретральная инстилляции процедура в взрослого мужчины мыши

Похожие видео

0 Просмотры

07:34

Изоляция одной внутриклеточных бактериальных сообществ, генерируется из мышиных модели инфекции мочевыводящих путей анализа течению одноклеточного

Похожие видео

0 Просмотры

09:24

Трансуретральная Индукция Мышь инфекции мочевыводящих путей

Похожие видео

0 Просмотры

05:23

Подготовка ткани мышиного мочевого пузыря для визуализации бактериальной инфекции

Похожие видео

0 Просмотры

02:06

Визуализация внутриклеточных бактериальных сообществ в инфицированном мочевом пузыре мыши

Похожие видео

0 Просмотры

02:32

Трансуретральная катетеризация и бактериальная инокуляция для создания модели инфекции мочевыводящих путей у самцов мышей

Похожие видео

0 Просмотры

11:20

Количественная оценка миграции нейтрофилов человека во культурный мочевого эпителия

Похожие видео

0 Просмотры

08:40

Создание и характеристика ИМП и CAUTI в мышиной модели

Похожие видео

0 Просмотры

10:23

Инфекции мочевыводящих путей в небольшой животной модели: трансуретральная катетеризация мужские и женские мышей

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026