Количественная оценка инфильтрации иммунных клеток в ткани мочевого пузыря мыши, инфицированной E. coli, с помощью проточной цитометрии

Чтобы количественно оценить инфильтрацию иммунных клеток в ткани мочевого пузыря мыши, инфицированной E. coli, поместите измельченную ткань в буфер для пищеварения, содержащий коллагеназу и дезоксирибонуклеазу.

Инкубируйте с регулярным встряхиванием, чтобы нарушить ткань.

Коллагеназа переваривает внеклеточный матрикс ткани, высвобождая клетки. Дезоксирибонуклеаза разрушает интерферирующую свободную ДНК.

После инкубации добавьте буфер с хелатирующим агентом и фетальную бычью сыворотку для инактивации пищеварительных ферментов.

Процедите переваренную смесь через ситечко, чтобы удалить остатки тканей и соединительной ткани, получив одноклеточную суспензию.

Центрифугируйте и ресуспендируйте клетки в буфере, содержащем Fc-блокирующие антитела. Эти антитела связываются с Fc-рецепторами иммунных клеток, предотвращая связывание неспецифических антител.

Добавьте меченые флуорофорами анти-CD45 антитела, которые связываются с трансмембранным белком CD45 на иммунных клетках.

Центрифугируйте и пропустите ресуспендированные клетки через сетчатое фильтр для удаления клеточных агрегатов.

С помощью проточного цитометра измерьте сигналы флуоресценции от флуорофор-конъюгированных антител на иммунных