JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 2:33 мин • July 8th, 2025
Возьмите культуру органоидов кишечника человека. Органоиды состоят из эпителиальных клеток, обращенных к центральному просвету, имитируя архитектуру in vivo.
Возьмем микроинъектор, содержащий спорозоиты в форме полумесяца — инфекционную форму — паразита Cryptosporidium parvum.
Вводите спорозоиты в просвет органоида.
Лектины паразитов связываются со специфическими углеводами на клетках эпителия, облегчая их вхождение в паразитофорную вакуоль.
Интернализованный паразит превращается в трофозоит — стадию питания, — который приобретает питательные вещества и подвергается бесполому размножению, образуя меронт I типа, содержащий мерозоиты — инвазивную форму.
Высвобождающиеся мерозоиты инфицируют соседние эпителиальные клетки и развивают меронты II типа, содержащие мерозоиты.
Мерозоиты проникают в соседние клетки и дифференцируются либо в микрогамонт, либо в макрогамонт — мужскую и женскую репродуктивные стадии.
Микрогамонт подвергается делению с образованием микрогамет, которые высвобождаются за пределы вакуоль.
Микрогамета оплодотворяет макрогамонт, производя зиготу.
Зигота подвергается делению, образуя спорозоитсодержащую ооцисту. При выходе спорозоиты повторяют цикл заражения.
Соберите органоиды, чтобы оценить прогресс инфекции.
Чтобы микроинъекции паразитов в апикальную сторону 3D-органоида, сначала используйте пуллер для микропипеток для приготовления стеклянных инъекционных капилляров. Используйте щипцы, чтобы разрезать кончик капилляра до диаметра от 9 до 12 микрометров, чтобы обеспечить легкий поток спорозоитов или ооцист, если вы решите вводить ооцисты напрямую, и используйте наконечники микрозагрузчика, чтобы заполнить каждый капилляр быстрой зеленой мечкой ооцисты или спорозоитной суспензии.
Затем загрузите первый капилляр, заполненный спорозоитом, в микроинъектор и используйте инвертированный микроскоп с 5-кратным увеличением и постоянным давлением, чтобы ввести от 100 до 200 нанолитров суспензии в каждый органоид.