$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Возьмите пластину Петри с разрезами листьев риса, расположенную над влажной фильтровальной бумагой, чтобы предотвратить высыхание.
Возьмем суспензию конидий — репродуктивных спор — патогенного гриба Magnaporthe grisea. Распылите на срезы листьев и инкубируйте в темных и влажных условиях.
Влага побуждает конидии выделять слизь, облегчая прикрепление к поверхности листа.
Конидии расширяют зародышевые трубки, кончик которых дифференцируется в куполообразный аппрессорий.
Высокая концентрация растворенного вещества внутри аппрессория создает тургорное давление, образуя пег.
Малый диаметр колышка фокусирует тургор-опосредованную силу на небольшой площади листа, вызывая проникновение в ячейку листа.
Стержень дифференцируется на инвазивные гифы для получения питательных веществ.
Инкубируйте срезы листьев под флуоресцентным светом на предмет роста грибков.
Гифы разветвляются внутри инфицированных клеток и проникают в соседние клетки через плазмодесматы.
Грибок выделяет токсины, чтобы вызвать некроз, что приводит к поражению листьев. Оцените поражения для оценки тяжести инфекции.
С помощью стерильных хирургических ножниц разрежьте три слоя фильтровальной бумаги на 8-сантиметровые круги. Поместите кружочки фильтровальной бумаги на 100-миллиметровые стерильные пластиковые пластины. Добавьте в каждую посуду ровно столько дистиллированной деионизированной воды, сколько нужно, чтобы пропитать фильтровальную бумагу. Затем поместите две стерильные зубочистки на расстоянии от 2 до 3 см друг от друга в каждую чашку для культуры.
Через две недели после посева соберите листья с растений риса, срезав нижнюю часть стебля. Используя термостатический инкубатор, культивируйте штаммы M. grisea на планшетах OTA при температуре 25 градусов Цельсия в течение четырех дней. Затем с помощью пипетки добавьте 2 миллилитра дистиллированной деионизированной воды на каждую тарелку. Используя петлю инокуляции, соскребите мицелий с диких и мутантных штаммов в остатки мицелия.
Соберите остатки мицелия и перенесите их на новую ОТА-планшет. Затем высушите остатки мицелия на чистой скамейке. Добавьте 2 миллилитра дистиллированной деионизированной воды в чашку для культивируемого мицелия и с помощью стерильного ватного тампона аккуратно соскребите конидии. Отфильтруйте суспензию конидии через два слоя линзовой бумаги, и переложите суспензию в новую 50-миллилитровую трубку. Затем центрифугируйте пробирку в течение 5 минут при 5000-кратном избежании.
После центрифугирования удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу раствором Tween 20, в результате чего концентрация составит 20 000 конидий на миллилитр. Залейте суспензию в ручной распылитель. Затем распылите примерно 10 миллилитров конидиальной суспензии на листья двухнедельных растений риса. Опрыскайте листья контрольных растений раствором Твин 20.
После этого выдержите листья в темной влажной коробке в течение 24 часов. Далее перенесите листья во влажную камеру с люминесцентным светом на 12 часов.