Установление инфекции листьев риса через грибковую инокуляцию через раны

Начните с посуды для культуры, содержащей рисовый лист с небольшими ранками, обнажая подлежащий эпидермис.

Нанесите увлажняющий раствор, содержащий Tween-20, создав благоприятную среду для роста грибков.

Поместите над раненым местом мицелиальную пробку Magnaporthe grisea, состоящую из конидиофоров с конидиями — спорами репродуктивного гриба.

Инкубируйте лист во влажной камере в условиях фотопериода, чтобы способствовать росту грибка.

Во время инкубации конидиофоры выделяют споры, которые прилипают к обнаженному эпидермису, развивая зародышевые трубки.

Зародышевая трубка дифференцируется в куполообразный аппрессорий, который создает высокое тургорное давление, образуя острый гиф — или пег.

Проникающий штифт выделяет ферменты, разрушающие клеточную стенку, облегчая их проникновение в эпидермальную клетку и дифференцировку в инвазивные гифы для получения питательных веществ.

Эти гифы растут и распространяются в клетках эпидермиса через плазмодесматы, соединяя каналы между клетками и устанавливая инфекцию.

Грибок выделяет токсины, вызывая некроз клеток и образование поражения вблизи раненого места на листьях, что свидетельствует о грибковой инфекции.

С помощью анатомической иглы соскребите три раны длиной от 2 до 3 сантиметров в основных жилках отделившихся листьев риса. Насадите соскобленные листья на зубочистки, и опрыскайте их раствором Твин-20. Затем вырежьте мицелиальную пробку размером 1/2 на 1/2 сантиметра из пластин OTA, содержащих каждый штамм M. griseus. Поместите пробки на раненые листья и выдержите их во влажной камере при температуре 25 градусов Цельсия в течение 3-8 дней.

После инкубационного периода осмотрите и оцените поражения в соответствии с системой подсчета баллов, предоставленной Международным научно-исследовательским институтом риса. Наконец, сфотографируйте больные листья, чтобы оценить заразность тестируемых сортов.