Интрабронхиальная инстилляция Streptococcus pneumoniae на иммунокомпетентных моделях грызунов

Получить стерильный интубационный аппарат, состоящий из металлической канюли с полиэтиленовой трубкой, соединенной с металлической иглой.

Прикрепите к игле шприц, содержащий Streptococcus pneumoniae, и заполните трубку.

Затем расположите анестезированную иммунокомпетентную крысу в положение лежа на спине.

Вставьте свободный конец металлической канюли в рот крысы. Продвигайте его в трахею по направлению к левому бронху и вниз по левому легкому на соответствующую глубину.

Продвиньте трубку до конца канюли и закапывайте бактериальную суспензию в левую долю легкого.

Бактериальная капсула и поверхностно-ассоциированные ферменты предотвращают попадание бактерий в слизь. Далее Streptococcus pneumoniae прикрепляются к поверхностным рецепторам на эпителиальных клетках бронхов, способствуя эндоцитозу и высвобождению на базолатеральную поверхность.

Бактерии выделяют токсины, которые повреждают эпителиальные клетки и барьеры, вызывая иммунный ответ.

Тем не менее, Streptococcus pneumoniae разработал стратегии уклонения от иммунного ответа хозяина и развития инфекции легких.

Положите чистый одноразовый коврик на рабочую поверхность, рядом с водяной баней.

Чтобы подготовить рабочую поверхность и устройство для интубации, сначала простерилизуйте металлическую канюлю и полиэтиленовую трубку в соответствии с текстовым протоколом, а затем перенесите их в стеклянной трубке для хранения на рабочую поверхность. Затем снимите колпачок с пробирки для хранения и сдвиньте конец ручки канюли к открытому концу трубки. С помощью стерильных щипцов извлеките одну длину полиэтиленовой трубки из стакана и вставьте ее через внутреннюю часть стерильной металлической канюли, убедившись, что она движется свободно. Поставьте направляющую отметку в заранее определенном месте с помощью несмываемой ручки.

Затем установите стерильную одноразовую иглу 25-го калибра на свободный конец полиэтиленовой трубки, вставив иглу на несколько миллиметров внутрь трубки. Затем используйте стерильный физиологический раствор, чтобы наполнить свежий одноразовый шприц объемом 1 миллилитр. Присоедините шприц к игле, установленной на полиэтиленовой трубке, и промойте весь объем физиологического раствора через трубку.

Выбросьте использованный шприц в контейнер для острых предметов. Затем наполните новый стерильный одноразовый шприц объемом 1 миллилитр инокулюмом на основе агара из водяной бани. Снова прикрепите иглу и трубку 25-го калибра и промывайте агар через трубку, нажимая на поршень до тех пор, пока трубка полностью не заполнится агаром.

После обезболивания крысы согласно текстовому протоколу поместите животное в лежачее положение на одноразовый коврик, головой вправо, а хвостом влево. Далее вставьте свободный конец металлической канюли в рот животного. Поверните канюлю так, чтобы свободный конец был наклонен вверх и аккуратно продвигайте ее в трахею, осторожно обходя гортанные структуры легким скручивающим движением.

Подтвердите введение в трахею, а не в пищевод, осторожно скользя канюлей немного вперед и назад несколько раз, при этом указательным пальцем левой руки пальпируйте кольца трахеи.

Чтобы обеспечить интубацию в трахею, а не в пищевод, слегка двигайте канюлю вперед и назад и нащупайте гребни. Если канюля плавно скользит вниз по горлу и гребни не прощупываются, извлеките устройство и повторите попытку.

Когда канюля достигнет бифуркации, где трахея разделяется на левый и правый бронхи, сделайте легкое вращающее движение в левую сторону животного, чтобы убедиться, что канюля вставлена в левый бронх.

Распространенной ошибкой является недостаточное введение инокуляции в легкое, что может блокировать дыхательные пути и препятствовать дыханию. Когда канюля повернута под правильным углом, она должна легко скользить в левый бронх и плавно продвигаться на соответствующую глубину.

Продвигайте металлическую канюлю до конца на полпути вниз по левому легкому, используя ранее установленную направляющую метку, чтобы подтвердить, что достигнута соответствующая глубина. Установив металлическую канюлю, переместите полиэтиленовую трубку на несколько миллиметров, используя ранее нанесенную направляющую метку на трубку, чтобы убедиться, что она продвинута ровно настолько, чтобы выйти из конца металлической канюли и не проколоть легкое.

Когда обе канюли на месте, с помощью прилагаемого шприца закапывают 100 микролитров агаровой суспензии глубоко в большую долю левого легкого. Извлеките несколько миллиметров трубки и аккуратно снимите неповрежденное устройство для интубации. Поместите его обратно в стеклянную трубку для хранения и переместите животное в новую клетку, чтобы оно восстановилось.