Канюляция брыжеечных лимфатических протоков у крысы для сбора лимфатической жидкости

Начните с крысы, подвергшейся хирургическому вмешательству, с обнаженным животом.

Найдите верхний брыжеечный лимфатический проток, лежащий перпендикулярно правой почке и расположенный спереди и параллельно брыжеечной артерии.

Проведите прямые щипцы через околопочечное жировое ложе.

Протяните лимфатическую канюлю через околопочечное жировое ложе, расположив один конец рядом с лимфатическим протоком и позволив другому концу выступать за пределы тела животного.

Далее сделайте небольшой разрез в лимфатическом протоке.

Заполните канюлю раствором антикоагулянта и введите его в лимфатический проток.

Внутри протока лимфатическая жидкость содержит несколько биомолекул, включая факторы свертывания, которые запускают каскад событий, ведущих к образованию тромбов.

Однако антикоагулянт связывается с факторами свертывания, подавляя их активность.

Это позволяет несвернутой лимфатической жидкости свободно протекать через канюлю.

Нанесите ветеринарный клей на входное отверстие, чтобы зафиксировать канюлю на месте.

За день до операции разрежьте канюли соответствующей длины и с помощью стерильного хирургического лезвия сделайте скос на кончике каждого куска трубки. Затем, чтобы подготовить интрадуоденальную канюлю, наденьте канюлю обратно на себя, а затем нагрейте канюлю, чтобы создать опорную точку в трубке.

В день операции сбрейте шерсть с правой стороны живота и области шеи и левой ключицы взрослой крысы, находящейся под наркозом, а затем асептически очистите хирургические области тремя последовательными растворами повидон-йода и 70% этаноловыми скрабами.

Чтобы канюлировать брыжеечный лимфатический проток, поместите животное правым боком вверх и с помощью стерильного лезвия скальпеля вскройте верхний слой стенки брюшной мышцы с прямым четырехсантиметровым разрезом, проходящим от мечевидного отростка к правому боку, примерно на два сантиметра ниже реберного края.

Втяните тонкую кишку под левую брюшную стенку и используйте два-три куска стерильной марли, пропитанной обычным физиологическим раствором, чтобы удержать ее на месте. Затем переведите крысу через 10-миллилитровый пластиковый шприц, расположенный горизонтально под спиной животного на уровне правой почки, чтобы помочь в визуализации брыжеечного лимфатического протока.

Найдите верхний брыжеечный лимфатический проток диаметром примерно от 0,5 до 1 миллиметра перпендикулярно правой почке и непосредственно рострально и параллельно темно-красной пульсирующей брыжеечной артерии. Обратите внимание, что у неголодающих крыс, как показано здесь, верхний брыжеечный лимфатический проток белый, непрозрачный и его легче визуализировать, чем у голодающих крыс.

Затем проведите пару прямых щипцов через околопочечное жировое ложе у нижнего края правой почки параллельно верхнему брыжеечному лимфатическому протоку, и через слои соединительной ткани, непосредственно под полой веной. Затем с помощью кончика щипцов протянуть лимфатическую канюлю через околопочечное жировое ложе так, чтобы один конец непосредственно примыкал к брыжеечному лимфатическому протоку, а другой отстранил от животного на уровне правой почки.

Затем, используя хирургический микроскоп и ювелирные щипцы, изолируйте брыжеечный лимфатический проток через вышележащие слои соединительной и жировой ткани путем тупого рассечения, начиная с нижнего конца и стараясь не повредить лимфатический проток. Когда проток будет изолирован, используйте кончик щипцов с тонким наконечником, чтобы сделать небольшое отверстие в лимфатическом протоке. Убедившись, что лимфатическая канюля полностью заполнена раствором антикоагулянта и нет воздушных промежуток, с помощью небольшой пары щипцов введите лимфатическую канюлю примерно на два-четыре миллиметра внутрь брыжеечного лимфатического протока через прокол.

Если канюляция прошла успешно, будет наблюдаться постепенное течение кишечной лимфы от свободно собирающегося конца канюли. Когда это произойдет, нанесите небольшую каплю цианоакрилатного клея на входное отверстие в лимфатический проток, чтобы закрепить канюлю, стараясь не закупорить сосуд излишками клея.