Методика индуцирования хронической экспериментальной аутоиммунной сухости глаз у крыс

Возьмем крысу, ранее иммунизированную антиген-адъювантной эмульсией, содержащей аутоантигены, происходящие из слезных желез, и чужеродные антигены.

Повторно введите эмульсию и внутрибрюшинно введите коклюшный токсин, обеспечивая максимальную активацию Т-клеток.

Активированные клетки дифференцируются в циркулирующие эффекторные Т-клетки памяти, ПЭМ и тканевые резидентные Т-клетки памяти, ТРМ. Определенный процент TRM находится в поверхностных тканях глаза.

Через определенный интервал времени введите антигены в подконъюнктиву и слезные железы, вызывая локализованное воспаление.

Субконъюнктивальные антигенпрезентирующие клетки, APC, представляют антигены TRM, вызывая высвобождение цитокинов.

Цитокины заставляют эпителиальные клетки конъюнктивы высвобождать хемокины, которые рекрутируют ПЭМ.

АПК реактивируют инфильтрированные ПЭМ, вызывая высвобождение провоспалительных цитокинов.

Цитокины вызывают гибель муцин-продуцирующих клеток конъюнктивы, снижая уровень муцина и вызывая нестабильность слезной пленки.

Цитокины вызывают гибель клеток слезной железы, снижая выработку слезы, и стимулируют эпителиальные клетки роговицы к производству матриксных металлопротеиназ, повреждая роговицу.

Оцените крысу на предмет клинических признаков, указывающих на успешную индукцию сухого глаза.

В нулевой день распределите 200 микролитров эмульсии, содержащей 1 миллиграмм экстракта слезных желез и 200 микрограммов овальбумина, и разложите адъювант Фройнда в 1-миллилитровые шприцы с люэровским замком, а также оснастите шприцы иглами 27-го калибра.

Не используя анестезию, подкожно вводите эмульсию у основания крысиных хвостов. Затем, на 14 день аналогичным образом, ввести 200 микролитров того же антигена и неполного адъюванта Фрейнда. В тот же день внутрибрюшинно вводят 300 нанограмм коклюшного токсина в 100 микролитрах PBS.

На 48-й день взвесьте необходимое количество овальбумина и растворите его в PBS, затем соедините овальбумин с размороженным экстрактом слезной железы, приготовленным ранее в этом видео, сделав антигенный раствор, содержащий 1 миллиграмм на миллилитр овальбумина и 1 миллиграмм на миллилитр экстракта слезной железы.

После обезболивания крысам введите 5 микролитров антигена в форнициальную субконъюнктиву глаза, затем, введите 20 микролитров антигена в слезную железу.