Анализ для оценки влияния тестируемых соединений на проникновение вируса и его слияние в клетках-хозяевах
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:38 мин. • July 8th, 2025
Возьмите раковые клетки печени и инкубируйте при низкой температуре, чтобы нарушить эндоцитоз.
Ввести рекомбинантный вирус гепатита С или ВГС, содержащий сконструированный геном РНК, кодирующий секретируемый репортер люциферазы.
Вирусные липопротеины взаимодействуют с протеогликанами на клетках хозяина, в то время как гликопротеины вирусной оболочки связываются со специфическими рецепторами хозяина.
В выбранные лунки добавьте тестируемое соединение, которое связывается с вирусными гликопротеинами.
При инкубации при физиологической температуре связанные вирусы эндоцитозируются.
Отбросьте неинтернализованные вирусы, добавьте питательную среду и инкубируйте.
В необработанных лунках гликопротеины способствуют слиянию вирусной оболочки и эндосомы, высвобождая нуклеокапсид, в то время как маскировка соединения ухудшает слияние в обработанных лунках.
При высвобождении РНК экспрессирует вирусные белки, в том числе люциферазу, которая секретируется внеклеточно.
Соберите люциферазосодержащую надосадочную жидкость и добавьте биолюминесцентный субстрат, который окисляется люциферазой для излучения света.
Снижение люминесценции в обработанных лунках по сравнению с необработанными указывает на и
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео