Визуализация формирования и закрытия фагосом на основе микроскопии TIRF
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:13 мин. • July 8th, 2025
Возьмем стеклянную чашку со стеклянным дном с полимерным покрытием, содержащую прилипшие к ее поверхности эритроциты или эритроциты, опсонизированные IgG.
Поместите чашку на предметный столик флуоресцентного микроскопа с полным внутренним отражением, поддерживая в нем физиологическую температуру.
Добавьте макрофаги, содержащие флуоресцентно меченые цитоплазматические пептиды, которые связываются с полимеризованным актином, облегчая визуализацию цитоскелета.
Во время визуализации направляйте лазерный луч под углом, превышающим критический угол, что приводит к внутреннему отражению и генерации затухающих волн в точке контакта.
Затухающие волны избирательно освещают флуорофоры на границе стекло-образец, что позволяет визуализировать фагоцитоз в режиме реального времени.
Fc-рецепторы макрофагов связываются с IgG-опсонизированными эритроцитами, вызывая скопление рецепторов вокруг области контакта.
Кластеризация запускает внутриклеточные сигнальные пути и активацию ГТФазы, стимулируя полимеризацию актина и рекрутирование динамина, образуя псевдоподы.
Псевдоподы простираются вокруг эритроцитов, образуя фагоцитарную чашу.
В конце концов, кончики псевдоподов сливаются. Накопленный динамин о
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео