Клеточный анализ для оценки поглощения тау-белка микроглией

Начните с многолуночной пластины с плоским дном, содержащей прилипшие мышиные микроглии — фагоцитарные клетки мозга.

Введите бессывороточную среду, содержащую иммунокомплексы. Эти комплексы состоят из антител, прикрепленных к фосфорилированным агрегатам тау-белка, которые образуются при некоторых нейродегенеративных заболеваниях.

Агрегаты Tau помечены pH-чувствительным зеленым флуоресцентным красителем.

Во время инкубации эти иммунокомплексы взаимодействуют с Fc-рецепторами клеток микроглии, способствуя их поглощению.

Эта эндосома, содержащая иммунокомплекс, сливается с лизосомой, образуя эндолизосому. Кислая среда эндолизосомы заставляет молекулы красителя флуоресцировать.

Промойте для удаления неинтернализованных иммунокомплексов.

Обработайте раствором трипсин-ЭДТА для отделения клеток.

Перенесите клеточную суспензию на U-образную донную пластину, расположенную над льдом, чтобы стабилизировать эндолизосому. Гранулируйте клетки и выбросьте надосадочную жидкость.

Промойте и повторно суспендируйте элементы с помощью буфера FACS.

Используя FACS, определите отдельные живые клетки и количественно оцените интенсивность зеленой флуоресценции для оценки поглощения тау-белка микроглией.

В