Методика создания гуманизированной модели мыши, привитой человеком с помощью PBMC

Возьмем мышь с ослабленным иммунитетом, обладающую только нейтрофилами и моноцитами в качестве функциональных иммунных клеток.

Внутрибрюшинно вводите циклофосфамид, препарат, который нацелен на иммунные клетки-предшественники.

Препарат проникает в активно пролиферирующие иммунные клетки-предшественники и сшивает нуклеиновые кислоты, вызывая гибель клеток. Гибель клеток-предшественников приводит к истощению иммунных клеток.

Перорально вводите дисульфирам, препарат, который образует аддукт с циклофосфамидом, уменьшая побочные эффекты, вызванные циклофосфамидом.

Подкожно вводите смесь опухолевых клеток человека и мононуклеарных клеток периферической крови, или PBMC, в подходящую смесь студенистых белков.

Белковая смесь образует гель, имитирующий физиологический внеклеточный матрикс, и захватывает опухолевые клетки.

Функциональное истощение иммунных клеток позволяет опухолевым клеткам размножаться и образовывать новые кровеносные сосуды, превращаясь в солидный опухолевый ксенотрансплантат.

Одновременно Т-клетки из введенных PBMC проникают в опухоль.

Опухолевый ксенотрансплантат демонстрирует рост и инфильтрацию опухоли Т-клеток, создавая гуманизированную модель мыши из ксенотрансплантата.

При истощении миелоидных клеток внутрибрюшинно вводите 100 мг на килограмм циклофосфамида и перорально 125 мг на килограмм дисульфирама самкам мышей с НОД/ТКИН в возрасте от 6 до 8 недель один раз в день в течение двух дней. Через 24 часа после второй дозы циклофосфамида и дисульфирама ресуспендировать 5 x 10⁶ свежевыделенных человеческих PBMC и 2,5 x 10⁶ Клетки опухолевой линии человека в 200 микролитров PBS плюс 50% матригеля на животное, и вводят весь объем подкожно в правый бок каждого экспериментального животного. Измеряйте и записывайте объем первичной опухоли 2 раза в неделю в течение 4–6 недель.