Культивирование эксплантов нейронов спирального ганглия мыши на многоэлектродных массивах

Начните с рассеченного сегмента внутреннего уха мыши, содержащего спиральный ганглий и орган корти, специализированные структуры внутреннего уха.

Орган корти содержит волосковые клетки, которые выступают в качестве рецепторов для слуховых сигналов.

Спиральный ганглий состоит из тел нейронных клеток, которые расширяют отростки для иннервации волосковых клеток кортиевого органа.

Отделите спиральный ганглий от органа корти и получите из него небольшие участки ткани или экспланты.

Теперь возьмем многоэлектродную матрицу с внеклеточным матриксовым покрытием, содержащую питательные среды.

Поместите экспланты на матрицу и расположите орган корти за пределами области электрода. Инкубировать.

Экспланты прикрепляются к покрытой многоэлектродной поверхности.

Регулярно добавляйте среды, содержащие сывороточные белки и факторы роста.

Во время культивирования компоненты среды и орган кортии обеспечивают нейротрофическую поддержку, способствуя росту нейритов из нейронов спирального ганглия над мультиэлектродом.

Отделите орган Корти от спирального ганглия in modiolus, удерживая базальную часть спирального ганглия и орган Корти щипцами, и медленно раскручивая орган Корти от основания к вершине. Затем вырежьте боковые экспланты из спирального ганглия с помощью щипцов или ножниц или ножей для тонкой микродиссекции.

Теперь перенесите спиральные ганглиозные экспланты и орган Corti в MEA. Затем поместите экспланты SG над областью электродов и органом Corti, примерно в 5 миллиметрах от области электрода. Поместите экспланты и орган Corti на MEA, избегая повреждения тканей. После этого осторожно поместите МЭА в инкубатор и культивируйте при температуре 37 градусов Цельсия и 5%_CO2.

На следующий день визуально осмотрите экспланты на предмет их прикрепления к МПС. Затем добавляйте 100 микролитров питательной среды, содержащей 10% FBS и BDNF, ежедневно в течение пяти дней подряд. На 6-й день добавьте 2 миллилитра питательной среды, содержащей 10% FBS и 5 нанограммов на миллилитр BDNF, и культивируйте ткань еще 13 дней.