Выделение флуоресцентно меченых нейронов из мозга мышей

Возьмем трансгенную кору головного мозга мыши, содержащую флуоресцентные нейроны, экспрессирующие белки.

Закрепите его на держателе для образца.

Установите держатель на вибратомный лоток, содержащий насыщенный кислородом аКСФ, для поддержания физиологического состояния тканей.

Используя заданные параметры, получить корональные срезы.

Поместите срезы в сетчатый держатель, содержащий насыщенный кислородом aCSF и блокаторы активности для их стабилизации.

Обрабатывайте срезы протеазами, чтобы переварить внеклеточный матрикс и разрыхлить клетки.

Промойте с помощью aCSF, чтобы удалить протеазы.

Переложите ломтики на тарелку для культуры с aCSF и сывороткой.

Под флуоресцентным микроскопом препарируйте участки среза, содержащие флуоресцентные нейроны.

Перенесите рассеченные фрагменты в пробирку, содержащую кислотно-мозговую жидкость и сыворотку.

Механически диссоциируйте ткань с образованием одноклеточной суспензии. Перенесите клетки в культуральную тарелку, содержащую ликвор.

Под флуоресцентным микроскопом используйте капиллярную пипетку для сбора флуоресцентных нейронов.

Поместите эти нейроны в культуральную пластину, содержащую aCSF, для дальнейшего анализа.

Препарируйте мозг усыпленной