Плазменные литографии поверхности паттернов для создания сотовых сетей

Общая цель данного эксперимента заключается в создании клеточного микроокружения для изучения биологических вопросов, связанных с индивидуальным и групповым поведением клеток, происходящим в микро- и наноразмерах. Это достигается за счет разработки шаблонов, которые в конечном итоге будут определять размещение ячеек. Затем эти конструкции переводятся на поверхности образцов с помощью фотолитографии, что позволяет создавать формы для плазменной защиты с помощью мягкой литографии.

Наконец, эти экранирующие формы расположены в виде штатива в чашке Петри, чтобы обеспечить избирательное воздействие плазмы на нижележащие поверхности, что оставляет чувствительный к клеткам химический рисунок на участках под каждой формой. Можно получить результаты, показывающие, как поведение клетки зависит от ее микроокружения и взаимодействия с соседними клетками. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы о влиянии микроокружения на поведение клеток, например, как взаимодействия между группами клеток влияют на явления более высокого порядка?

И как субклеточные наноразмерные сигналы влияют на такие функции, как миграция здоровья и дифференцировка? Во-первых, с помощью суперклея прикрепите узорчатый слайд к стопке пустых слайдов. Далее создайте емкость из алюминиевой фольги чуть больше стопки слайдов, и достаточно большую, чтобы вместить 30 грамм полидиметилсубоксана или PDMS.

Поместите стопку слайдов в контейнер, а затем просверлите PDMS над стопкой слайдов, чтобы создать первоначальную форму. Затем дегазируйте PDMS, поместив контейнер в вакуумную камеру. Разбейте все пузырьки, присутствующие в PDMS, быстро сняв и заменив палец над трубкой впускного клапана несколько раз, чтобы на короткое время позволить воздуху проникнуть в камеру.

Клапан закрывается на пять минут непрерывной дегазации. Затем дайте PDMS затвердеть в вытяжке с чистым потоком при комнатной температуре в течение одного-двух дней. После отверждения PDMS отделяется от основного шаблона, формируя форму.

Затем вылейте тонкий слой из шести граммов двухкомпонентной эпоксидной смолы, которая только что была перемешана в течение одной минуты, в мастер-форму. Немедленно дегазируйте эпоксидную смолу с помощью нескольких циклов разрушения пузырьков, прежде чем эпоксидная смола застынет. После того, как эпоксидная смола Дега будет оставлена в течение часа, она будет частично отвержена.

Добавьте больше эпоксидной смолы в форму без дегазации, чтобы получить более толстую структуру, с которой будет легче работать на последующих этапах. Затем дайте эпоксидной смоле застыть в течение одного-двух дней. Как только эпоксидная форма затвердеет, снимите эпоксидную смолу с главной формы PDMS, а затем оберните ленту вокруг эпоксидной формы, чтобы сформировать контейнер.

Затем можно создать рабочую форму путем заливки PDMS на эпоксидную форму, дегазации PDMS и отверждения новой формы в течение одного-двух дней. После того, как рабочая форма затвердеет, снимите форму с эпоксидной смолы и храните обе в чашках Петри в герметичном пластиковом контейнере внутри проточной колпака для поддержания чистоты. Чтобы подготовить форму для нанесения поверхностного рисунка, вырежьте небольшие срезы рабочей формы лезвием бритвы и поместите срезы в чашку Петри.

Места расположения этих секций формы маркируются на обратной стороне чашки Петри перманентным маркером, путем создания контура вокруг того места, где находятся секции формы, формируют штатив из секций и ждут штатива, чтобы обеспечить конформный контакт между рабочей формой и поверхностью чашки Петри. Посмотрите на дно тарелки, чтобы убедиться в правильном размещении, о чем свидетельствует наличие каналов, которые можно увидеть невооруженным глазом или с помощью небольшой увеличительной линзы. Поместите сборку в плазменную камеру.

Начните плазмотерапию после плазменной терапии. Снимите форму и груз и поместите чашку Петри в шкаф для биобезопасности под ультрафиолетовым светом на 10 минут для стерилизации. Храните там блюдо до тех пор, пока оно не засеется ячейками.

Разбавьте выбранные экспериментальные клетки в их стандартных питательных средах для достижения желаемого слияния. После размещения на узорчатой поверхности чашки Петри налейте в чашку Петри три миллилитра клеточного раствора. Инкубируйте чашку Петри при температуре 37 градусов Цельсия, 5% углекислого газа, 100% влажности от нескольких часов до нескольких дней, чтобы позволить клеткам собраться по схеме, созданной плазматической клеткой.

Структурирование проверяется с помощью фазово-контрастной микроскопии. При культивировании клеток нейробластомы добавляйте 10 микромолей ретиноевой кислоты ежедневно до тех пор, пока не будет наблюдаться дифференцировка клеток в нейроноподобное состояние. Заменяйте стандартные среды для клеточных культур каждые три-четыре дня.

Типичным результатом реализации методики плазменной литографии является формирование рисунка клеток, напоминающего некую произвольную или естественную структуру. Пример этого можно увидеть на этом рисунке с нейронами, которые были дифференцированы с ретиноевой кислотой по узору линий. И вот на этом рисунке, где были созданы линии и сети нейронов, также могут быть использованы другие типы клеток, кроме нейронов, как показано на следующих двух рисунках, на этом рисунке показаны эндотелиальные клетки пуповинной вены человека, а на этом рисунке показаны клетки скелетных мышц C, 2 C12, образующие сетки, как видно. Здесь.

Такие материалы, как полилизин, также могут быть структурированы для облегчения прикрепления определенных типов клеток и для других целей.