Выделение и культивирование дофаминовых нейронов среднего мозга первичной эмбриональной мыши

Возьмем ткань дна среднего мозга, выделенную из вентральной области среднего мозга эмбрионов мышей.

Ткань богата развивающимися дофаминовыми нейронами, которые высвобождают нейромедиатор дофамин.

Добавьте ферментный раствор для разрушения тканевого матрикса, тем самым разрыхлив клетки.

Добавьте сывороточный раствор, содержащий ДНКазу I, и механически диссоциируйте переваренную ткань с образованием клеточной суспензии. Сывороточные белки ингибируют ферменты, в то время как ДНКаза I разрушает внеклеточную ДНК, высвобождающуюся во время лизиса клеток, предотвращая слипание клеток.

Дайте тканевым остаткам осесть и перенесите взвешенные клетки в свежую пробирку.

Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, затем повторно суспендируйте клетки в среде дофаминовых нейронов, или DPM.

Возьмите микропланшет, покрытый субстратом для клеточной культуры, в центре лунок, создав микроостровки.

Перенесите клетки в середину микроостровков, чтобы культивировать их с высокой плотностью.

Инкубируют, позволяя клеткам прилипнуть к микроостровкам.

Заполните лунки ДПМ и инкубируйте, способствуя росту дофаминовых нейронов.

Чтобы создать первичные эмбриональные культуры среднего мозга из эмбрионов мышей