Обнаружение физиологических реакций сенсорных нейронов у дрозофил

Приложите к покровному стеколу анестезированную генетически модифицированную Drosophila melanogaster на боку.

Вытяните его передние лапы и закрепите их, чтобы обнажить сегменты предплюсны.

Эти сегменты имеют вкусовые нейроны, экспрессирующие кальциевые индикаторные комплексы, которые флуоресцируют в кальций-связанной форме.

Нарисуйте гидрофобный барьер вокруг мухи, чтобы удержать раствор.

Дайте мухе восстановиться и наложите буферный солевой раствор на открытые сегменты тарзальных участков, чтобы увлажнить их.

Под конфокальным микроскопом рассмотрите сегменты тарзы и визуализируйте вкусовые нейроны на различной глубине для получения флуоресценции предварительной стимуляции.

Добавьте на сегмент раствор для стимуляции, содержащий липофильные лиганды.

Эти лиганды связываются с рецепторами вкусовых нейронов, инициируя сигнальные пути и запуская открытие кальциевых каналов.

Это позволяет ионам кальция из внеклеточной жидкости проникать в цитоплазму и связываться с кальциевыми индикаторными комплексами, что приводит к флуоресцентному излучению.

При повторном наблюдении увеличение флуоресценции нейронов подтверждает физиологическую реакцию нейронов на лиганд.

Обезболив муху, приложите ее