Мечение заполненных биоцитином интернейронов в срезах гиппокампа крысы для визуализации

Возьмите фиксированные и пермеабилизированные срезы гиппокампа крысы, содержащие заполненные биоцитином интернейроны с инактивированными эндогенными пероксидазами.

Добавьте авидин-биотиновые комплексы (ABC), содержащие пероксидазу хрена (HRP), и инкубируйте, позволяя авидину связываться с биоцитином.

Смойте несвязанную азбуку.

Добавьте смесь хромогенного субстрата и усилителя металлов, затем инкубируйте.

Введите перекись водорода для активации HRP, которая окисляет подложку с образованием темного осадка, в то время как усилитель улучшает контраст.

Переложите срезы на фильтровальную бумагу и удалите излишки буфера. Обработайте тетраоксидом осмия для усиления контраста.

Поместите ломтики на предметное стекло и закрепите. Обезвоживайте их, повышая концентрацию этанола.

Промойте ломтики в абсолютном этаноле и оксиде пропилена.

Добавьте смолу, чтобы проникнуть в ткани.

Поместите ломтики в планшет и нагрейте, чтобы смола полимеризовалась. Переложите ломтики на предметное стекло, установите покровную крышку и затвердейте смолой.

С помощью световой микроскопии визуализируйте темные интернейроны, заполненные биоцитином.

Поместите срезы в чистый стеклянный флакон, содержащий PBS. Проведите р