Проведение иммуногистохимии на ткани мозга нечеловекообразного примата

Начнем с химически фиксированного участка мозга примата.

Фиксаторы на основе альдегида сшивают белки, сохраняя структуру тканей, но оставляют некоторые реакционноспособные остатки альдегида.

Промойте, чтобы удалить слой криопротектора, окружающий участок ткани.

Добавьте восстановитель для нейтрализации реакционноспособных альдегидных групп, образующих побочные продукты реакции.

Промойте, чтобы удалить эти побочные продукты и излишки восстановителей.

Нанесите блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.

Добавьте первичные антитела, нацеленные на белок, экспрессируемый в определенных участках мембраны нейронов.

Промойте для удаления несвязанных антител.

Добавьте биотинилированные вторичные антитела, нацеленные на первичные антитела.

Промойте, чтобы удалить несвязанные антитела.

Наложите авидин-биотин-пероксидазные комплексы, которые связываются с вторичными антителами.

Промойте еще раз, чтобы удалить несвязанные комплексы.

Вместе с перекисью водорода вводят хромогенный субстрат. В присутствии перекиси водорода фермент пероксидаза окисляет субстрат, образуя коричневые осадки.

Начните с переноса участков неподвижного мозга приматов с акролеином толщиной 50 микрон,