Конфокальная визуализация движения митохондрий в олигодендроцитах в органотипических культурах срезов мозга

Начните с установки камеры для ванны конфокального микроскопа с циркулирующим раствором для визуализации и контролируемой температурой.

Возьмем гидрофильную полимерную мембрану, содержащую органотипический срез мозга мыши, в котором олигодендроциты были преобразованы для экспрессии специфичного для митохондрий красного флуоресцентного белка и специфичного для цитозоля зеленого флуоресцентного белка.

Двойная флуоресценция позволяет четко визуализировать динамику митохондрий в цитозоле олигодендроцита.

Погрузите кусочек в центр ванны и закрепите его якорем для арфы.

Опустите цель и выберите здоровый олигодендроцит для сканирования.

Отрегулируйте мощность лазера, чтобы свести к минимуму токсичность клеток и фотообесцвечивание.

Установите параметры микроскопа, а затем запишите покадровые изображения флуоресцентно меченых митохондрий.

Захватывайте изображения z-стека на разной глубине, чтобы получить трехмерное изображение всей ячейки с высоким разрешением.

Обработайте изображения, чтобы визуализировать движение митохондрий внутри олигодендроцита.

Используйте щипцы, чтобы перенести конфетти с ломтиком из чашки Петри на верхнюю часть ванны. Затем поместите два кончика щипцов с каждой стороны ко