Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:15 мин. • August 7th, 2025
Возьмем, к примеру, генетически модифицированного щенка мыши, несущего STOP-кассету с локсP-флуоресцентным белком, которая блокирует красный флуоресцентный белок или экспрессию RFP.
Закрепите щенка на изготовленной на заказ стереотаксической раме и накройте ее льдом для поддержания анестезии.
Продезинфицируйте кожу головы и отметьте лямбда в качестве ориентира.
Выровняйте иглу для инъекции по полосатым координатам относительно лямбды и проколите череп.
Втяните иглу к поверхности черепа, затем введите ее в целевую глубину.
Вводите смешанный с красителем вирусный вектор в полосатое тело с контролируемой скоростью. Вектор кодирует зеленые флуоресцентные белки или GFP и Cre-рекомбиназу.
Медленно извлекайте иглу, чтобы предотвратить обратный поток раствора.
Извлеките щенка и дайте ему восстановиться.
В стриарных клетках вирус высвобождает свой геном, обеспечивая экспрессию Cre-рекомбиназы и GFP. Cre вырезает кассету STOP с фланговой стороны loxP, активируя экспрессию RFP.
Одновременная экспрессия GFP и RFP подтверждает успешную манипуляцию генами.
Поместите щенка с перчаткой в головной лоток и насыпьте немного колотого льда вокруг латексного рукава, чтобы сохранить анестезию от гипотермии. Затем
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео