Стереотаксическая микроинъекция вирусного вектора для генной манипуляции у щенка мышиного стриатума

0 просмотров4:15 мин • August 7th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмем, к примеру, генетически модифицированного щенка мыши, несущего STOP-кассету с локсP-флуоресцентным белком, которая блокирует красный флуоресцентный белок или экспрессию RFP.

Закрепите щенка на изготовленной на заказ стереотаксической раме и накройте ее льдом для поддержания анестезии.

Продезинфицируйте кожу головы и отметьте лямбда в качестве ориентира.

Выровняйте иглу для инъекции по полосатым координатам относительно лямбды и проколите череп.

Втяните иглу к поверхности черепа, затем введите ее в целевую глубину.

Вводите смешанный с красителем вирусный вектор в полосатое тело с контролируемой скоростью. Вектор кодирует зеленые флуоресцентные белки или GFP и Cre-рекомбиназу.

Медленно извлекайте иглу, чтобы предотвратить обратный поток раствора.

Извлеките щенка и дайте ему восстановиться.

В стриарных клетках вирус высвобождает свой геном, обеспечивая экспрессию Cre-рекомбиназы и GFP. Cre вырезает кассету STOP с фланговой стороны loxP, активируя экспрессию RFP.

Одновременная экспрессия GFP и RFP подтверждает успешную манипуляцию генами.

Поместите щенка с перчаткой в головной лоток и насыпьте немного колотого льда вокруг латексного рукава, чтобы сохранить анестезию от гипотермии. Затем потрите голову щенка 70% этанолом и найдите ориентир для лямбды. Отметьте его маркером. Затем направьте кончик иглы на лямбду и установите переднюю, заднюю и медиальную боковые координаты равными нулю.

Затем, сверившись с атласом мозга, переместите руку для инъекции к целевому участку. Например, стриатум у щенков P2 находится на 2,4 миллиметра впереди лямбды, на 1,0 миллиметра по обе стороны от средней линии и на 1,7 миллиметра вентрально. Далее отметьте с помощью ручки положение быстрого зеленого красителя на пробирке PE10. Затем медленно начинайте проникать иглой через кожу и череп до тех пор, пока кончик иглы не коснется поверхности черепа.

Установите дорсальную вентральную координату равной нулю. Затем медленно опустите иглу к целевому месту. Оказавшись на месте, подождите одну минуту, чтобы паренхима вернулась к своей нормальной форме. Затем запустите программу микровпрыска со скоростью 100 нанолитров в минуту. Во время инъекции наблюдайте за быстрым движением зеленого красителя в полиэтиленовой трубке.

Крайне важно медленно вводить иглу через кожу и череп до тех пор, пока кончик иглы не коснется поверхности черепа. Во время инъекции крайне важно следить за движением красителя Fast Green в полиэтиленовой трубке.

После того, как инъекция будет завершена, подождите одну минуту, а затем медленно поднимите иглу на половину глубины проникновения DV. Затем подождите еще 30 секунд, прежде чем приступить к медленному извлечению иглы из головы щенка.

После завершения инъекции важно подождать одну минуту, прежде чем медленно поднимать иглу до половины глубины проникновения DV, затем подождать еще 30 секунд, прежде чем медленно извлечь иглу из головы щенка.

После того, как все целевые участки будут введены, прогрейте щенка в течение 20 минут в инкубаторе с температурой 33 градуса Цельсия.

Проверяйте щенка каждые пять минут, пока он не восстановит лежачее положение на грудине. Затем верните щенка к его матери.

05:51

Интрацеребровентрикулярное и внутрисосудистой инъекции вирусных частиц и флуоресцентных микрогранул в неонатальном мозга

Похожие видео

0 Просмотры

11:40

Манипуляция одиночными нервными стволовыми клетками и нейронами в ломтиках мозга с помощью роботизированной микроинъекции

Похожие видео

0 Просмотры

10:49

Нацеливание на мышиные нейронные пластины с помощью внутриутробной наноинъекции (NEPTUNE) на эмбриональном дне 7.5

Похожие видео

0 Просмотры

04:12

Стереотаксическое введение вирусов для стабильной генетической модификации в мышиной модели

Похожие видео

0 Просмотры

03:58

Стереотаксическое введение вирусных векторов для перепрограммирования глиальных клеток в мышиной модели

Похожие видео

0 Просмотры

04:17

Стереотаксическая инъекция вируса для целенаправленного редактирования нейронных генов в мозге мыши

Похожие видео

0 Просмотры

09:06

Стереотаксической инъекции микроРНК-экспрессирующих Lentiviruses в области CA1 гиппокампа мыши и оценка поведенческих результатов

Похожие видео

0 Просмотры

08:39

Стереотаксическая инъекции вирусных векторов для генной манипуляции Условные в спинной мозг мыши

Похожие видео

0 Просмотры

08:22

Стереотаксические Микроинъекции Вирусные векторы, экспрессирующие Cre рекомбиназы для изучения роли генов-мишеней в Кокаин Условные предпочтения Место

Похожие видео

0 Просмотры

10:15

Интрацеребровентрикулярное Вирусный Инъекция по неонатологии мозга мыши для устойчив и распространен нейронов трансдукции

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026