Инкапсуляция фактора роста нерва в наночастицы высокой плотности, имитирующие липопротеины

Возьмем микроцентрифужную пробирку, содержащую фактор роста нервов или NGF, нейротрофический белок, и протамин, положительно заряженный белок-переносчик.

Протаминовые комплексы с NGF посредством электростатического взаимодействия, которые облегчают инкапсуляцию и предотвращают деградацию.

В стеклянный флакон добавьте этанол, содержащий липидные вспомогательные вещества, имитирующие липидный состав липопротеидов высокой плотности или ЛПВП для образования наночастиц.

Смешайте с дополнительным этанолом для равномерного диспергирования. Выпарить этанол под азотом до образования тонкой липидной пленки.

Добавьте сверхчистую воду и гомогенизируйте с высокой скоростью, чтобы обеспечить самосборку в прототипы наночастиц, имитирующих ЛПВП.

Введите комплекс NGF-протамина в наночастицы и инкубируйте при перемешивании, чтобы способствовать инкапсуляции NGF-протамина при сохранении их биологической активности.

Охладите суспензию для стабилизации наночастиц, затем добавьте аполипопротеин A-I, основной структурный белок ЛПВП, и продолжайте перемешивать, чтобы интегрировать белок в структуру наночастиц.

Эти наночастицы, имитирующие NGF, теперь готовы к дальнейшим исследованиям.

Для начала смешайте 10 микролитров NGF с 10 микролитрами протамина USP в микроцентрифужной пробирке объемом 1,5 миллилитра и дайте ей постоять 10 минут при комнатной температуре, чтобы образовался комплекс. Далее добавьте в стеклянный флакон 59 микролитров фосфатидилхолина и 11 микролитров сфингомиелина.

Также добавьте 4 микролитра фосфатидилсерина, 15 микролитров олеата холестерина и 45 микролитров сукцината токоферилполиэтиленгликоля. Перемешайте и выпарьте этанол под слабой струей азота в течение примерно пяти минут. Все вспомогательные вещества должны образовать маслянистую тонкую пленку на дне стеклянного флакона.

Добавьте в флакон 1 миллилитр сверхчистой воды и гомогенизируйте при 9500 об/мин в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы сформировать прототип наночастиц или НЧ. Затем добавьте приготовленный комплекс в прототип НП. Инкубируйте суспензию при температуре 37 градусов Цельсия в течение 30 минут, при помешивании, с помощью небольшого бруска для перемешивания в стеклянном флаконе.

Охладите МП, помешивая при комнатной температуре, еще 30 минут. После охлаждения добавьте 106 микролитров аполипопротеина A-I и перемешайте при комнатной температуре в течение ночи, чтобы образовались конечные NGF HDL, имитирующие НЧ.