Стереотаксическое введение вирусных векторов для перепрограммирования глиальных клеток в мышиной модели

Закрепите трансгенную мышь под наркозом в стереотаксической рамке с обнаженным черепом.

Эта мышь экспрессирует Cre-рекомбиназу в глиальных клетках.

Расположите стереотаксическую руку, удерживающую капиллярную трубку, над черепом и выровняйте ее над брегмой.

Отрегулируйте стереотаксические оси для точного наведения.

Просверлите отверстие в целевом месте, убедившись, что твердая мозговая оболочка остается неповрежденной. Удалите костные отломки.

Промойте капиллярную трубку буфером. Нарисуйте пузырь воздуха, затем загрузите аденоассоциированный вирус, несущий неактивное нейронное перепрограммирование и гены флуоресцентных белков.

Опустите капиллярную трубку на целевую глубину и введите вирусный раствор в область, богатую глиальными клетками.

Осторожно втяните трубку, чтобы предотвратить обратный поток.

Закройте разрез и дайте ему восстановиться.

Интернализованные вирусы доставляют инактивированные гены loxP-фланга в глиальное ядро. Cre рекомбиназа переворачивает их, активируя нейронные перепрограммирование генов и стимулируя нейронную конверсию. Перепрограммированные интернейроны экспрессируют флуоресцентный белок под нейрон-специфичным промотором.

Чтобы ввести факторы перепрограммирования, по