Интратекальная доставка исследуемого соединения в центральную нервную систему крысы

Начните с крысы под наркозом с имплантированной направляющей канюлей в поясничный отдел спинномозгового канала.

Введите катетерно-проволочный узел через направляющую канюлю под углом в интратекальное пространство, где циркулирует спинномозговая жидкость или ликвор

.

Извлеките направляющую канюлю и медленно продвигайте катетер вглубь.

Затем полностью извлеките провод и подключите катетер к системе доставки.

Введите стерильный физиологический раствор в спинномозговой канал, обеспечив чистое проходимость.

Медленно введите раствор тестового соединения в спинномозговую жидкость, а затем промойте стерильным физиологическим раствором.

Отсоедините систему доставки, разрежьте катетер и запечатайте его конец методом термосварки.

Пришить термосвариваемый катетер к соединительной ткани, а затем закрыть кожу над катетером. Очистите место и дайте крысе восстановиться.

Испытуемое соединение распространяется через спинномозговую жидкость в спинной и головной мозг, которые составляют центральную нервную систему или ЦНС.

В ЦНС он входит в нейроны и обладает терапевтическим потенциалом.

Для установки катетера и введения соединения определите две естественные ямки между мышцами над выбритым тазом. Одной рукой держа ямки, другой рукой мягко надавливайте и ощупывайте позвоночник от каудального до рострального направления, чтобы найти первое крупное углубление между позвонками. После определения межпозвоночного пространства между позвонками S1 и L6 слегка сдвиньтесь рострально, чтобы определить межпозвоночное пространство между позвонками L5 и L6.

С помощью скальпеля сделайте разрез длиной не более 2 сантиметров в коже и мышечной капсуле на этом участке, по средней линии от рострального до каудального направления, так, чтобы место инъекции оказалось в центре разреза. Используйте ножницы для пресечения, чтобы рассечь соединительную ткань, пока мышечный слой не станет визуализированным. Сделайте 1-сантиметровый разрез в мышечной капсуле, непосредственно латерально к дорсальному спинномозговому отростку поясничного позвонка L6.

Расположите узел иглы направляющей канюли рядом с передней стороной шестого поясничного позвонка и протолкните узел в межпозвонковое пространство вдоль передней части шестого позвонка так, чтобы конец иглы проникал в спинномозговой канал.

Используйте тупые щипцы для определения местоположения дорсальных спинномозговых отростков поясничного позвонка L6. Затем протолкните иглу вдоль передней стороны шестого позвонка в межпозвонковое пространство.

Протолкните направляющую канюлю на место вдоль иглы. Извлеките иглу и вставьте катетерную проволоку в сборе в направляющую канюлю. Наклонив катетер под углом примерно 45 градусов к позвоночному каналу, с силой введите конец катетера примерно на 0,3 сантиметра внутрь канала.

Удалите стилетную проволоку примерно в 2,5 сантиметрах от интратекального кончика катетера и продвигайте катетер в спинномозговой канал до тех пор, пока отметка в 2 сантиметра на катетере не станет видна ниже мышцы. Когда катетер будет на месте, снимите направляющую канюлю, чтобы оставить катетер и стилетную проволоку на месте.

Продвигайте катетер в спинномозговой канал до тех пор, пока на входе в канал не окажется отметка 2 сантиметра, и полностью извлеките стилетную проволоку. Спинномозговая жидкость может визуализироваться при входе в имплантируемый катетер. Затем подсоедините узел приемного катетера к дистальному концу имплантированного катетера с помощью конца иглы 30-го калибра.

Далее загрузите 60 микролитров стерильного физиологического раствора в шприц объемом 100 микролитров, а во второй шприц загрузите болюс из 30 микролитров исследуемого состава. Подсоедините шприц с физиологическим раствором к концу адаптера трубки узла приемного катетера и смойте 20 микролитров стерильного физиологического раствора в интратекальное пространство.

Когда весь физиологический раствор будет промыт, замените шприц с физиологическим раствором на шприц с болюсной нагрузкой и введите 30 микролитров исследуемого соединения во внутрибольничное пространство в течение 30 секунд. Когда весь болюс будет доставлен, замените шприц, загруженный болюсом, другим шприцем, наполненным физиологическим раствором, и промойте катетер еще 40 микролитрами физиологического раствора.

Когда будет введен второй объем физиологического раствора, отсоедините блок вводящего катетера от имплантированного катетера и с помощью пары очень горячих, стерилизованных бусинами щипцов для рассечения зажима трубки для асептического разрезания и термогерметизации имплантированного катетера. Используйте рассасывающиеся монофиламентные швы, чтобы закрепить термосваренный катетер к соединительной ткани, а затем используйте нерассасывающиеся швы, чтобы закрыть кожу. Затем с помощью марли и физраствора смыть кровь с кожи, и поместите крысу в отапливаемый инкубатор с контролем до полного лежачего состояния.