Выделение и очистка рекомбинантных гликопротеинов миелина олигодендроцитов

MOGtag представляет собой рекомбинантный гликопротеин миелина олигодендроцитов, слитый с метками солюбилизации и очистки для экспериментальных исследований аутоиммунного энцефаломиелита.

Чтобы изолировать MOGtag, суспензируйте бактериальные клетки, экспрессирующие MOGtag, в буфере для лизиса и инкубируйте.

Ферменты и детергенты в буфере разрушают липиды мембраны и разрушают клеточную стенку.

Ультразвуком для дальнейшей лизиации клеток, высвобождая нерастворимые тела включений, содержащие MOGtag.

Центрифуга для гранулирования включенных тел. Выбросьте надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в буфере и инкубируйте.

Добавьте гидрохлорид гуанидина, затем инкубируйте для растворения MOGtag.

Перенесите растворимые белки на заряженную никелевую смолу, перемешайте и инкубируйте с встряхиванием, чтобы MOGtag смог соединиться с ионами никеля.

Центрифуга для гранулирования связанного MOGtag. Извлеките надосадочную жидкость, повторно суспендируйте гранулу в элюирующем буфере и инкубируйте с встряхиванием.

Имидазол в буфере элюирования высвобождает MOGtag из смолы.

Снова центрифугируйте, соберите очищенный надосадочный ток, содержащий MOGtag, и сохраните его для дальнейшего анализа.

Равном