JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:15 мин • June 17th, 2025
Начните с шванновских клеток или СК, миелинизирующих глиальных клеток периферической нервной системы, культивируемых в средах.
Перенесите ячейки в колориметрическую чашку, оснащенную электродами с обеих сторон.
Поместите чашку на наносекундное импульсное электрическое поле или устройство nsPEF и установите желаемую интенсивность электрического поля.
Подавайте импульсы nsPEF, осторожно вращая электроды до появления искр.
Сразу после стимуляции отделите электроды и продолжайте культивирование клеток.
nsPEF разрушает мембраны SC, создавая переходные нанопоры, которые обеспечивают приток кальция. В конечном итоге мембраны снова герметизируются.
Внутриклеточный кальций активирует кальций-связывающие белки, запуская сигнальные пути, которые активируют гены, участвующие в прогрессии клеточного цикла.
Устойчивая передача сигналов кальция также активирует факторы транскрипции, которые приводят к дедифференцировке СК в фенотип репарации с последующей пролиферацией.
Кроме того, увеличивается секреция нейротрофических факторов, которые поддерживают выживание и рост нейронов.
В настоящее время модель готова для изучения роли nsPEF-стимулированных СК в регенерации периферических нервов после травмы.
Для начала ресуспендируйте культивируемые клетки RSC96 в 1 миллилитре питательной среды DMEM и перенесите их в колориметрические чашки с электродами с обеих сторон. Включите выключатель питания прибора и поверните ручку, чтобы установить интенсивность электрического поля. Осторожно вращайте электроды до тех пор, пока не появятся искры, что позволит ячейкам получать 5 импульсов наносекундных импульсных электрических полей в соответствии с заданными интенсивностями напряженности поля. Сразу же разделите два электрода после лечения.