JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:25 мин • August 7th, 2025
Возьмите микроинъектор с микроиглой, содержащий высокоэффективный ретроградный транспорт или вирусный вектор HiRet.
Гликопротеины в оболочке вируса HiRet облегчают его проникновение в нейроны через синапсы. Вирус также несет ген, кодирующий флуоресцентный белок.
Возьмем крысу под наркозом с обнаженным поясничным отделом спинного мозга от 1 до 4.
Используя среднюю линию спинного мозга в качестве ориентира, расположите иглу над местом инъекции.
Опустите иглу в спинной мозг.
Начните вводить вирус с контролируемой скоростью.
Дайте достаточно времени для диффузии вируса, прежде чем извлекать иглу.
Нейрональные рецепторы связываются с вирусными гликопротеинами, облегчая проникновение вируса через синапс и транспортировку через аксон к соме, процесс, называемый ретроградным транспортом.
Вирусный ген интегрируется с геномом хозяина, обеспечивая экспрессию флуоресцентных белков.
Эти вирусы также путешествуют через подключенные нейроны, что позволяет отслеживать нейронные пути.
Поместите иглу на среднюю линию спинного мозга и с помощью шкалы Нониуса на микроманипуляторе направьте иглу в сторону на 0,8 миллиметра. Затем опустите иглу к спинному мозгу до тех пор, пока она не будет углубляться, но не прокалывать твердую мозговую оболочку. И с помощью быстрых вращательных движений проколите твердую мозговую оболочку иглой, пока кончик иглы не погрузится на глубину 1,5 миллиметра.
После того, как игла будет на месте, запрограммируйте инъектор на подачу вируса со скоростью 400 нанолитров в минуту и подтвердите, что вирус проникает в спинной мозг, наблюдая за продвижением фронта красителя. После завершения инъекции дайте игле отдохнуть в спинном мозге в течение двух-пяти минут, чтобы облегчить диффузию вируса, прежде чем медленно извлечь иглу для позиционирования в месте следующей инъекции.