Адресная доставка вещества в мозг мыши путем инфузии во внутреннюю сонную артерию

Возьмем, к примеру, мышь под наркозом с обнаженной общей сонной артерией или ОСА, которая разветвляется на наружную сонную артерию (ЭХА) и внутреннюю сонную артерию (ВСА).

Плотно зашите дистальный отдел ЭХА, поместите свободный узел рядом с бифуркацией, затем зафиксируйте ОСА и ВСА, чтобы ограничить кровоток.

Надрежьте ЭХА, затем введите капилляр, соединенный со шприцем, содержащим исследуемое вещество.

Продвинуте капилляр между бифуркацией и зажимом CCA, затем закрепите его, затянув проксимальный узел ECA.

Снимите зажим ICA и введите вещество для адресной доставки в мозг, минуя системное кровообращение.

Вещество проникает через гематоэнцефалический барьер и достигает паренхимы мозга.

После того, как ECA и ICA будут открыты, с помощью щипцов поместите сегмент нейлонового шва длиной 1 сантиметр под наружную сонную артерию, затем поместите второй сегмент длиной 1 сантиметр. Затем завяжите постоянный узел в самой высокой точке ECA.

В самой низкой возможной точке ECA, непосредственно над разветвлением CCA, завяжите более свободный съемный узел. Затем с помощью зажимов для сосудов закройте CCA в максимально низкой точке и закройте ICA.

Правильное закрытие внутренней сонной артерии перед тем, как сделать небольшой надрез на наружной сонной артерии, предотвратит кровотечение.

Теперь с помощью пружинных ножниц для микродиссекции сделайте 2-миллиметровый разрез в ЭХА между двумя узлами.

Важно, чтобы разрез был небольшим, так как большой порез приведет к вытеканию вещества, которое будет настаиваться.

Соберите инфузионную систему, прикрепив 6 дюймов капиллярной трубки к туберкулиновому шприцу, содержащему 250 микролитров вещества, подлежащего вливанию. Затем аккуратно введите кончик капиллярной трубки в разрез в ЭХА. Продолжайте продвигать наконечник вперед, пока он не достигнет середины между разветвлением и зажимом на CCA.

Завяжите нижний узел ECA. Убедитесь, что узел достаточно свободен, чтобы обеспечить капиллярную текучесть, и достаточно тугой, чтобы предотвратить утечку. Затем извлеките зажим из ICA. Осторожно надавите на поршень шприца, позволяя вливать вещество со скоростью примерно 10 микролитров в секунду.

После вливания исследуемого вещества поместите зажим обратно на ICA. Аккуратно снимите капиллярную трубку, затем полностью завяжите нижний узел ECA. Извлеките зажим из ICA и CCA. Затем снимите втягивающий или тканевые крючки и подушку.

Очистите область, которую нужно зашить, стерильным физиологическим раствором, а затем закройте разрез нейлоновыми швами. После введения одобренного противовоспалительного средства и анальгетика для облегчения послеоперационного дискомфорта поместите животное в клетку на грелку не менее чем на один час и следите за восстановлением.