Визуализация субклеточной динамики кальция в нейронах Caenorhabditis elegans

Возьмите два отдельных трансгенных штамма Caenorhabditis elegans на предметных стеклах с агаровыми прокладками. Подушечки содержат раствор для катания с паралитическим средством, которое сводит к минимуму движения.

Вентральный нервный канатик червей, или VNC, содержит возбуждающие интернейроны, которые экспрессируют цитоплазматические показатели кальция у одного штамма и показатели митохондриального кальция у другого.

Поместите покровное стекло для скручивания червей, ориентируя VNC для визуализации, затем поместите их под флуоресцентный микроскоп.

Используйте видимый свет, чтобы найти червей, затем переключитесь в режим флуоресценции.

В покоящихся нейронах низкий уровень внутриклеточного кальция удерживает показатели несвязанными, что приводит к слабой флуоресценции.

Спонтанная активность нейронов открывает потенциал-зависимые кальциевые каналы, обеспечивая приток кальция.

В штамме с цитоплазматическими показателями кальций связывается с показателями, усиливая цитоплазматическую флуоресценцию.

Избыток цитоплазматического кальция поступает в митохондрии по каналам. В штамме с митохондриальными показателями кальцийсвязывание увеличивает митохондриальную флуоресценцию.

Визуализируйте нейроны