Интратекальная доставка вирусов в мышиной модели для лечения заболеваний центральной нервной системы

Наполните шприц раствором, содержащим аденоассоциированные вирусы, или AAV, и лидокаин, местный анестетик.

Поместите бодрствующую мышь в положение лежа и закройте ее верхнюю часть тела.

Возьмитесь за тазовый пояс мыши и сбрейте нижнюю часть спины, чтобы обнажить кожу. Простерилизуйте его йодом и этанолом.

Найдите щель в нижней части позвоночника и осторожно надавите, чтобы отметить ее.

Поверните хвост, чтобы выровнять позвоночник, и вставьте шприц вертикально.

Регулируйте угол до тех пор, пока не произойдет взмах хвостом, подтверждающий введение иглы в интратекальное пространство, где протекает спинномозговая жидкость или спинномозговая жидкость

.

Медленно вводите раствор для равномерного распределения.

Вирусные частицы связываются с нейронами, проникают внутрь и высвобождают свой генетический материал в ядро, обеспечивая целевую экспрессию генов.

Лидокаин временно блокирует нервные сигналы, вызывая кратковременный паралич ног, подтверждая успешную доставку в спинномозговую жидкость.

Этот протокол делает интратекальное доставление эффективным методом лечения заболеваний ЦНС.

Перед началом процедуры приложите иглу 27-го калибра к 25-микролитровому шприцу Гамильтона и совместите скошенный кончик иглы с объемной шкалой на шприце, затем осторожно загрузите в шприц 8 микролитров 4 умно-10 до 10-х геномных копий вирусного раствора, стараясь не допустить образования пузырьков.

Затем поместите проснувшуюся мышь в возрасте от 30 до 70 дней весом от 12 до 30 граммов на кровать в лежачем положении в биозащитном капюшоне и накройте верхнюю часть тела стерильной марлей, чтобы успокоить мышь и избежать укусов. Крепко возьмитесь за тазовый пояс мыши, большим пальцем с одной стороны и указательным и средним пальцами с другой стороны, удерживая кожу между двусторонними тазовыми поясами натянутыми большим и указательным пальцами, затем сбрейте шерсть между двусторонним тазовым поясом и простерилизуйте открытые участки кожи с помощью скраба на основе йода и 70% этанола.

Для прямой интратекальной доставки раствора аденоассоциированного вируса пальпируйте межпозвоночное пространство по средней линии между двусторонним тазовым поясом и с помощью ногтя сделайте углубление в коже, чтобы обозначить межпозвоночное пространство от L5 до L6. Слегка и осторожно поверните основание хвоста, чтобы показать среднюю линию позвоночника, и отрегулируйте скос иглы по направлению к голове животного. Плотно зафиксировав мышь на месте, выровняйте иглу по средней линии позвоночника и осторожно и вертикально введите иглу в центр углубления, удерживая шприц в центральной сагиттальной плоскости.

Когда игла соприкоснется с костью, медленно уменьшите угол примерно до 30 градусов и вставьте иглу в межпозвоночное пространство. Резкое взмах хвостом является признаком успешного вхождения в интрадуральное пространство. Когда игла войдет в межпозвоночное пространство, кончик будет ощущаться прочно зажатым. Введите векторный раствор и удерживайте иглу во внутридуральном пространстве в течение одной минуты, затем медленно извлекайте иглу с вращением, чтобы свести к минимуму утечку.